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产品货号 | 产品名称 | 规格 |
62ST3PEC | HTRF KINEASE STK S3 KIT | 20K PTS |
HTRF KinEASE 试剂盒系列提供了一种简单的生化方法来研究激酶活性、筛选抑制剂并对其进行表征。三个丝氨酸 / 苏氨酸激酶(STK)试剂盒和一个酪氨酸激酶(TK)试剂盒分别提供了一种半通用的方法来评估丝氨酸 / 苏氨酸和酪氨酸残基上的磷酸化。HTRF KinEASE STK S3 检测已在 43 种丝氨酸 / 苏氨酸激酶上进行了验证。本页面的检测验证部分列出了这些激酶,并提供了设置的技术提示。该试剂盒系列还包括一个探索试剂盒,以帮助在使用未经验证的酶时确定三个 STK 试剂盒中的哪一个是合适的。
检测原理:
每个 HTRF KinEASE 试剂盒基于相同的检测形式,并使用通用的生物素化底物、磷酸化特异性铕穴状化合物标记的单克隆抗体和 SA - XL665。所有三个 STK 肽底物在用于抗体检测的序列部分是相同的,旁边是被酶识别的可变序列。用于磷酸化的靶向残基位于两者之间,既是酶活性(未磷酸化)序列的一部分,也是抗体检测(磷酸化)序列的一部分。已经表明,三种不同的可变序列可以用于研究大多数丝氨酸 / 苏氨酸激酶。
检测方案:
如图所示,所有的 HTRF KinEASE 检测方法都以相同的方式工作,涉及两个步骤:
步骤 1:激酶反应 将激酶在有或没有化合物和适当底物的情况下孵育。仅对于酪氨酸激酶,在激酶缓冲液中加入补充的酶促缓冲液。加入 ATP 以启动反应。
步骤 2:检测 加入铕穴状化合物和 XL665 偶联物。检测缓冲液中含有 EDTA 以停止酶促反应。
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