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产品货号 | 产品名称 | 规格 |
62ST3PEC | HTRF KINEASE STK S3 KIT | 20K PTS |
HTRF KinEASE 试剂盒系列提供了一种简单的生化方法来研究激酶活性、筛选抑制剂并对其进行表征。三个丝氨酸 / 苏氨酸激酶(STK)试剂盒和一个酪氨酸激酶(TK)试剂盒分别提供了一种半通用的方法来评估丝氨酸 / 苏氨酸和酪氨酸残基上的磷酸化。HTRF KinEASE STK S3 检测已在 43 种丝氨酸 / 苏氨酸激酶上进行了验证。本页面的检测验证部分列出了这些激酶,并提供了设置的技术提示。该试剂盒系列还包括一个探索试剂盒,以帮助在使用未经验证的酶时确定三个 STK 试剂盒中的哪一个是合适的。
检测原理:
每个 HTRF KinEASE 试剂盒基于相同的检测形式,并使用通用的生物素化底物、磷酸化特异性铕穴状化合物标记的单克隆抗体和 SA - XL665。所有三个 STK 肽底物在用于抗体检测的序列部分是相同的,旁边是被酶识别的可变序列。用于磷酸化的靶向残基位于两者之间,既是酶活性(未磷酸化)序列的一部分,也是抗体检测(磷酸化)序列的一部分。已经表明,三种不同的可变序列可以用于研究大多数丝氨酸 / 苏氨酸激酶。
检测方案:
如图所示,所有的 HTRF KinEASE 检测方法都以相同的方式工作,涉及两个步骤:
步骤 1:激酶反应 将激酶在有或没有化合物和适当底物的情况下孵育。仅对于酪氨酸激酶,在激酶缓冲液中加入补充的酶促缓冲液。加入 ATP 以启动反应。
步骤 2:检测 加入铕穴状化合物和 XL665 偶联物。检测缓冲液中含有 EDTA 以停止酶促反应。
瑞孚迪(Revvity)是瑞孚迪生物医学(上海)有限公司旗下品牌,将“不可能”视为灵感,将“做不到”视为原动力。瑞孚迪提供健康科学解决方案、前沿技术和专业服务,业务涵盖科研探索、开发、诊断、治疗的端到端全流程。依托在转化多组学技术、生物标志物鉴定、成像、疾病的预测、筛查、检测与诊断、信息学等领域的多年深耕,瑞孚迪正以科技之能,突破人类潜能的边界。
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Q:HTRF和AlphaLISA适合如何选择?
A:HTRF和Alpha两种方法各有优势,首先确认酶标仪是否具有相应的模块,如果都具备,从实验便利性和数据呈现来看,HTRF操作更方便,但是Alpha数据表现、样本适应性上优势明显,客户根据自己需求进行选择。
Q:为什么样本稀释倍数越低,试剂盒测出的待检物质的含量反而越低?
A:按照经验来看,应该是出现hook效应了,一般用夹心法检测的话,如果样品的浓度远超过标曲的线性范围,就会出现测量结果降低的情况,需要对样品做进一步的稀释。
Q:搭配HTRF浅孔板货号?
A:96孔浅孔板:66PL96001(1个板子),66PL96005(5个板子),66PL96025(25个板子),66PL96100(100个板子)
384孔板:6008280(50个板子),6008289(200个板子)。
Q:如何查产品效期?
A:首先看说明书,如果说明书没有明确的保质期,则用产品货号在revvity官网查到该产品的页面,页面最下方有该产品的data sheet,data sheet里面有具体的保质期限。
Q:Promega的ADP GLO,Revvity是否有可以替换的产品?
A:一般promega卖的是酶和底物的打包,再买他们的ADP-GLO搭配测酶活,可以替换成revvity MTO的CDK系列激酶活性检测试剂盒或者HTRF/Lance 激酶检测通用型试剂。
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