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单细胞测序技术被广泛的应用于功能基因组学研究中,为了探究基因组的动态表达、调控机制以及这些机制如何影响生物体的表型,通过单细胞测序更深入地了解细胞间的异质性,揭示在生物体发育、疾病进展过程中单个细胞所扮演的关键角色,对于理解人类疾病的发生机制、开发新的治疗方法以及推动精准医疗的发展具有重要意义。
然而单细胞测序技术作为工具去使用并不容易,要经过单细胞悬液制备,细胞活力质控,单细胞标签,mRNA逆转录,cDNA扩增、文库制备等一系列操作后才能进入测序环节,这些过程必不可少且相当复杂,对操作人员的专业水平要求高,如何建立自动化标准化流程、稳定输出高质量文库仍然是个难题。
瑞孚迪(Revvity)专注于自动化技术30余年,在测序样本前处理全流程自动化的解决方案上已大有所成。现在我们进一步结合公司在细胞成像、核酸检测、文库构建等优势产品,为功能基因组研究中的单细胞测序领域贡献力量。
单细胞悬液制备
Omni Bead Ruptor珠磨均质仪可以完美的解决单细胞测序制备流程的第一步---单细胞悬液制备。它是一个多功能的台式设备,其独特的载架运动模式设计有助于彻底的样本解离。加上优化的解离管,样本可被均匀地分解成高活力的单细胞悬浮液。
组织样本可简单的放入组织解离管中进行分解,该解离管经独特的优化设计。
设备可同时容纳多达12个解离管,组织分解方法经过充分的技术验证。
通过使用我们的样品分解技术优化您的单细胞分离方案,以取代传统的手动制备方法,不仅提高了通量和速度,更关键的,提高您获得优质结果的信心!
细胞质控
精确的细胞计数和活率评估对于单细胞测序至关重要。瑞孚迪细胞计数仪以其先进的硬件设计、智能化的软件识别,结合定制试剂与耗材,为细胞定量提供快速有效的方法,可从复杂混乱的样本中精准识别和定量目标细胞群,用于单细胞测序文库制备前对细胞的质量控制。
Cellaca MX和Cellometer Ascend细胞计数仪特点:
精确定量细胞
排除无核杂质
低样品量消耗
灵活通量选择
瑞孚迪细胞计数平台配套有全面的试剂、耗材和标准微珠。
文库制备
瑞孚迪拥有一套测序前样本制备与质控的全流程解决方案。在文库制备环节,我们最新开发了一款专属机型---Fontus NGS,专门应用于NGS文库制备。在单细胞测序的文库构建工作中,自动化建库仪发挥举足轻重的作用,无论是形成微滴法 (Droplet) 还是微孔法 (Microwell) ,单细胞被标签后,都是要进行逆转录、cDNA扩增与纯化、文库构建等制备操作,这些既关键又费时费力的工作都可以在单细胞文库构建仪上轻松完成。
Fontus单细胞文库构建仪为不同通量要求提供两个机型,24通量和96通量,均可实现全流程自动化,包括温控、PCR扩增纯化等。
不同的单细胞测序平台的样本制备流程也不同,Fontus预置了几大主流单细胞测序平台的自动化程序方案(经厂家验证),实现了开箱即用,同时强大的厂家技术服务可支持新自动化方法开发。
DNA和RNA质控
LabChip GX Touch 核酸分析仪使用基于芯片的微流控技术,DNA和RNA的定量和片段大小可以在几秒钟内完成。小于150 nL的样品用于片段尺寸和浓度分析,生成高分辨率的、可重复的数据。
LabChip微流控技术使凝胶电泳现代化。
全自动样本检测分析最快可达30秒。
提供RNA和DNA样本完整性量化指标,质量评分。
数字化数据格式,便于分析、审查、共享和存档。
不同通量选择:处理通量1-24个样品的型号使用灵活,节约时间;处理通量1-384个样品的型号适用于高通量工作流程。
我们以Fontus单细胞建库仪为例详细说明其特点
我们以市面上常见的微滴法 (Droplet) 单细胞转录组测序工作流程举例展示瑞孚迪的组合产品
文库结果表现
表1:使用瑞孚迪建库仪对24个单细胞油包水后样本进行建库的浓度结果
使用瑞孚迪建库仪构建的文库用LabChip质控仪检测片段大小
瑞孚迪产品组合加速单细胞测序流程,助力功能基因组学研究。每个工作环节皆有多款设备可供选择,其中自动化建库仪有几个款式可选,均可实现单细胞测序从RNA反转录开始到文库建好的自动化流程。不同配置的选择、不同通量的选择,让用户可以自由的选择适合自身需求的设备,标准化的操作、卓越的精准度、均一稳定的结果输出,让您在解放双手的同时建立实验保障的信心。
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