检测原理：
在 HTRF 相互作用检测中，一部分（直接或间接）用供体标记，另一部分用受体标记（同样直接或间接）。信号强度与两部分的结合成正比。在此处所示的例子中：单克隆抗体 Anti GST-Tb 穴状化合物与带 GST 标签的 A部分结合，而B 部分* 与用 HTRF 受体标记的特异性抗体结合。* B部分也可以是生物素化的、带标签的、Fc 融合的。在这些情况下，使用相应的用受体标记的 HTRF 试剂（抗标签、抗物种、蛋白 A、链霉亲和素）进行检测。

检测方案：
右侧的例子描述了使用 20 µL 最终检测体积来检测带 GST 标签的A部分和未带标签的B部分 * 之间相互作用的方案。分配两个部分（10 µL），孵育，加入单克隆抗体 Anti GST-Tb 穴状化合物（5 µL）和用受体标记的抗B部分（5 µL），孵育并读取。* B部分也可以是生物素化的、带标签的、Fc 融合的或直接标记的。在这些情况下，使用相应的用受体标记的 HTRF 试剂（抗标签、抗物种、蛋白 A、链霉亲和素）进行检测。

检测细节：
测试次数与活性部分如何相关？
每孔的平均结合物数量反映了总体生物材料含量。通常优选使用活性部分的量而不是总结合物的量。对于穴状化合物和 d2 结合物，总结合物的量等于活性部分的量，因为标记的分子量可以忽略不计。对于用 XL665 标记的实体则不是这样，总结合物的量将根据 XL665 结合物的最终摩尔比而变化，然而，Revvity 提供的活性部分的量是恒定的，并且基于订购的测试次数。

推荐的穴状化合物和 XL665 结合物的量：
穴状化合物结合物不能过量，以防止读数器饱和和不可接受的背景水平。在大多数情况下，1 到 5nM 的穴状化合物浓度是合适的，并且根据所使用的与 HTRF 兼容的读数器，在 620nm 处将产生 20,000 到 80,000 cps。XL665 结合物必须尽可能与其检测对应物匹配，以便最大数量的生物分子被 XL665 受体标记。因此，要检测浓度为 20nM 的带标签分子，抗标签 - XL665 的浓度应是等摩尔或更高。