HTRF ERK P-T202/Y204 KIT-Revvity

磷酸化 ERK 检测试剂盒旨在用于在 Thr202/Tyr204 位点磷酸化的 ERK的定量检测，作为 GPCR（G 蛋白偶联受体）和 RTK（受体酪氨酸激酶）靶向筛选的 MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）通路读出指标。简单的混合后可进行直接读取，省去了所有洗涤步骤，以实现更快的分析和高质量的输出。

产品特点

工作原理：
磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）检测原理

磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）检测用于测量在 Thr202/Tyr204 位点磷酸化的 ERK。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板，不需要凝胶、电泳或转膜。磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）检测使用两种标记抗体，一种带有供体荧光团，另一种带有受体。第一种抗体因其对蛋白质上磷酸化基序的特异性结合而被选择，第二种抗体因其能够识别不依赖于其磷酸化状态的蛋白质而被选择。蛋白质磷酸化使得涉及两种标记抗体的免疫复合物形成，这使供体荧光团与受体紧密接近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。其强度与样品中存在的磷酸化蛋白的浓度直接成正比，并在无需洗涤的检测形式下提供了一种评估蛋白质磷酸化状态的方法。

phospho-erk-thr202-tyr204-assay-principle

磷酸化 ERK 双板检测方案：
双板方案涉及在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中，之后加入磷酸化 ERK HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和融合度。

磷酸化 ERK 单板检测方案：
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 ERK 可以在一个用于培养、刺激和裂解的单板上进行。无需洗涤步骤。这个为高通量筛选设计的方案能够实现微型化，同时保持强大的 HTRF 质量。

简化的通路：
MAPK/ERK 细胞信号通路

MAPK/ERK 信号级联由参与生长和分化的多种受体激活。核心信号转导级联引发对众多细胞过程的调节，包括黏附、迁移、凋亡、分化和代谢。MEK1/2 在 Tyr204 和 Thr202 位点催化 ERK1/2 的磷酸化。作为响应，ERK 磷酸化数百种细胞质和细胞核底物。MAPK 信号的广泛复杂性和多样性使 ERK 成为生物学中的关键调节因子和主要信号节点。

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Q：HTRF和AlphaLISA适合如何选择？

A：HTRF和Alpha两种方法各有优势，首先确认酶标仪是否具有相应的模块，如果都具备，从实验便利性和数据呈现来看，HTRF操作更方便，但是Alpha数据表现、样本适应性上优势明显，客户根据自己需求进行选择。

Q：为什么样本稀释倍数越低，试剂盒测出的待检物质的含量反而越低？

A：按照经验来看，应该是出现hook效应了，一般用夹心法检测的话，如果样品的浓度远超过标曲的线性范围，就会出现测量结果降低的情况，需要对样品做进一步的稀释。

Q：搭配HTRF浅孔板货号？

A：96孔浅孔板：66PL96001（1个板子），66PL96005（5个板子），66PL96025（25个板子），66PL96100（100个板子）
384孔板：6008280（50个板子），6008289（200个板子）。

Q：如何查产品效期？

A：首先看说明书，如果说明书没有明确的保质期，则用产品货号在revvity官网查到该产品的页面，页面最下方有该产品的data sheet，data sheet里面有具体的保质期限。

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产品货号	产品名称	规格
64ERKPEG	HTRF ERK P-T202/Y204 KIT	500 PTS
64ERKPEH	HTRF ERK P-T202/Y204 KIT	10K PTS

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