Pannarase耐高盐全能核酸酶是一种非特异性核酸内切酶,该酶产品是从大肠杆菌菌株BL21中表达纯化得到。该蛋白酶是由149个氨基酸构成的单链多肽,分子量为16.8 kDa,Ca2+和Mg2+可以稳定其构象。该酶可以将任何形式的DNA和RNA(线性、环形、超螺旋)降解成3’-单核苷酸及二核苷酸,并可在一系列宽泛的操作条件下保持高效性。本产品可用于盐浓度较高、偏碱性的病毒下游纯化。
产品性质:
项目 |
描述 |
规格 |
10万/50万/500万 U/管 |
分子量 |
16kDa |
纯度 |
≥99% (SEC-HPLC) |
比活性 |
≥2x106 U/mg |
最适pH |
8.5-10 |
最适温度 |
37°C |
辅助因子 |
0.55-5 mM Mg2+;0.5-10 mM Ca2+ |
储存温度 |
-20°C,避免反复冻融 (由于甘油的存在,-20°C条件下不会冻住) |
活力单位:通过测定其裂解鲱鱼精DNA底物的能力(herring Sperm DNA, Sigma,目录号D7290)一个单位Pannarase全能核酸酶活力定义为在37°C pH8.0反应条件下30分钟内导致A260值降低1.0(相当于完全消化37μg DNA)。
产品特点:
SDS-PAGE鉴定:
非还原及还原的SDS-PAGE显示蛋白分子量约16kDa,未见杂蛋白。
SEC-HPLC纯度测定:
尺寸排阻色谱显示高纯度,无聚集体产生。
应用案例:
1. Na+离子对Pannarase酶活性的影响
Pannarase在中等Na+浓度条件下活性较高,300 mM时仍有36.2%的活性,但浓度超过600mM时酶活性基本完全丧失。
2. Mg2+离子对Pannarase酶活的影响
1 mM Mg2+可以提升Pannarase内切酶40%左右的活性,但Mg2+并不是必须的
3. Ca2+离子对Pannarase酶活的影响
1 mM Ca2+可以提升Pannarase内切酶28%的活性,但Ca2+并不是必须的
4. 不同pH条件下Pannarase酶活性比较
Pannarase酶活性最适pH为pH8.0 - 11.0
运输和保存方法:干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。
推荐使用条件:
条件 |
最适条件* |
有效条件# |
Mg2+ |
0.55-5 mM |
0-10 mM |
Ca2+ |
0.5-10 mM |
0-10 mM |
pH |
8.5-10 |
7.0-11.0 |
Na+ |
0-150 mM |
0- 500 mM |
*“最适条件”指的是在此条件下Pannarase核酸酶可保持>90%的活性
**“有效条件”指的是在此条件下Pannarase核酸酶可保持>15%的活性
注:具体参数可参见Pannarase 产品性能部分
使用方法:
1.对于大肠杆菌破碎液
为了达到降低粘度的目的,加入核酸酶的用量须根据破碎液的菌体浓度来决定,如果菌体浓度在50%,建议加入的核酸酶的量为1:1000-5:1000,即50万-250万U/L。如果菌体浓度在5%,则可以按照1:10000-5:10000的比例加入。
2.对于细胞裂解液
可以按照106-107个细胞加入500单位核酸酶。
3.对于纯化后的腺病毒或者病毒疫苗
由于DNA含量相对较少,可以按照万分之一到万分之五也就是每毫升5个单位的最终浓度加入。
注意事项:
1.酶的最佳作用条件为pH 8.0–11.0,37°C,30min。
2.酶活性比较稳定,室温放置短期内不会有太大影响,长时间保存需放置在-20°C冰箱内。酶用不含甘油缓冲液稀释后尽快使用,不推荐冻存后再使用。
3.对于仅为降低粘度为目的,可以直接加入核酸酶,室温缓慢搅拌30 min。
产品货号 |
产品名称 |
产品规格 |
CYG006F0010 |
Pannarase耐高盐核酸酶 |
100,000 U |
CYG006F0050 |
Pannarase耐高盐核酸酶 |
500,000 U |
CYG006F0500 |
Pannarase耐高盐核酸酶 |
5,000,000 U |
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