工作原理：

总 ERK 检测原理：
总 ERK 检测用于量化细胞裂解物中 ERK 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板，不需要凝胶、电泳或转膜。总 ERK 检测使用两种标记抗体：一种与供体荧光团偶联，另一种与受体偶联。这两种抗体对蛋白质上不同的表位具有高度特异性。在细胞提取物中存在 ERK 的情况下，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体紧密接近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。其强度与样品中存在的蛋白质浓度直接成正比，并在无需洗涤的检测形式下提供了一种评估蛋白质表达的方法。

总 ERK 双板检测方案：
双板方案涉及在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中，之后加入总 ERK HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和融合度。

总 ERK 单板检测方案：
使用 HTRF 试剂检测总 ERK 可以在一个用于培养、刺激和裂解的单板上进行。无需洗涤步骤。这个为高通量筛选设计的方案能够实现微型化，同时保持强大的 HTRF 质量。

检测验证：
在各种细胞系上对总 ERK1/2 检测的验证：
人类（Hela、A431、HEK293、Jurkat）、小鼠（NIH 3T3）和仓鼠（CHO-K1）细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% 二氧化碳的条件下培养 2 天。移除细胞培养基后，加入 3 毫升补充裂解缓冲液 3 并孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用 16 微升细胞裂解物检测 ERK1/2。其他物种的细胞系尚未经过测试，因此必须根据具体情况进行评估。

总 ERK 检测用于控制 ERK1/2 的磷酸化：
使用磷酸化 ERK1/2 和总 ERK1/2 检测的双板检测方案，A431 细胞（每孔 100,000 个细胞）用 EGF 激活 10 分钟。正如预期的那样，获得的结果显示在 EGF 刺激下 ERK1/2 磷酸化呈剂量反应性增加，而 ERK1/2 的表达水平保持恒定。

简化的通路：
MAPK/ERK 细胞信号通路。

MAPK/ERK 信号级联由参与生长和分化的多种受体激活。核心信号转导级联引发对众多细胞过程的调节，包括黏附、迁移、凋亡、分化和代谢。MEK1/2 在 Tyr204 和 Thr202 位点催化 ERK1/2 的磷酸化。作为响应，ERK 磷酸化数百种细胞质和细胞核底物。MAPK 信号的广泛复杂性和多样性使 ERK 成为生物学中的关键调节因子和主要信号节点。

ERK 在 G 蛋白偶联受体（GPCR）信号通路中的作用：
ERK 的调节在 GPCR 信号通路中起着重要作用，因此是一个重要的可测量的 GPCR指标。GPCR 通过 G 蛋白发挥作用，调节广泛的细胞功能。在受到刺激时，这些受体激活效应物如腺苷酸环化酶和磷脂酶 C，这不仅影响细胞内第二信使如 cAMP 和 Ca²⁺的浓度，还介导 ERK1/2 的磷酸化。GPCR 也已被证明以不依赖 G 蛋白但依赖 β-arrestin 的方式介导 ERK1/2 的激活。