Pannarase是一种来自于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),经基因工程改造的核酸内切酶,能够将各种类型的DNA和RNA降解成3~5个碱基长度的5’-单磷酸寡核苷酸,又被称为“全能核酸酶”。广泛用于疫苗、细胞与基因治疗等领域的病毒纯化工艺。
产品性质:
项目 |
描述 |
规格 |
10万/50万/500万 U/管 |
分子量 |
27kDa |
纯度 |
≥99% (SEC-HPLC) |
比活性 |
≥2x106 U/mg |
最适pH |
8.0 |
最适温度 |
37°C |
辅助因子 |
1-10 mM Mg2+ |
缓冲液 |
20 mM Tris-HCl pH 8.0, 2 mM NaCl, 2 mM MgCl2, 50% (v/v) 甘油 |
储存温度 |
-20°C,避免反复冻融 (由于甘油的存在,-20°C条件下不会冻住) |
活力单位:通过测定其裂解鲱鱼精DNA底物的能力(herring Sperm DNA, Sigma,目录号D7290)一个单位Pannarase全能核酸酶活力定义为在37°C pH8.0反应条件下30分钟内导致A260nm值降低1.0(相当于完全消化37ug DNA)。
产品特点:
SEC-HPLC:(纯度99.72%)
尺寸排阻色谱显示高纯度,无聚集体产生
LC-MS检测:
液质联用分析蛋白分子与理论值一致,无杂质峰,结构均一
应用案例:
对质粒DNA的酶切活性
对比不同品牌核酸酶的酶切效果图
(反应条件:20uL反应体系其中质粒DNA浓度为1mg/ml)
运输和保存方法:干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。
推荐使用条件:
反应条件 |
最适条件* |
有效条件** |
Mg2+ |
1-2 mM |
1-10 mM |
pH |
8.0-9.2 |
6.0-10.0 |
Na+/K+浓度 |
0-20 mM |
0-150 mM |
温度 |
37℃ |
4-42℃ |
(Dithiothreitol)DTT |
0-100 mM |
0-300 mM |
2-mercaptoethanol |
0-100 mM |
0-300 mM |
PO43- |
0-10 mM |
0-100 mM |
* “最适条件” 指的是在此条件下Pannarase 核酸酶可保持>90%的活性
** “有效条件” 指的是在此条件下Pannarase 核酸酶可保持>15%的活性
使用方法:
1.对于大肠杆菌破碎液
为了达到降低粘度的目的,加入核酸酶的用量须根据破碎液的菌体浓度来决定,如果菌体浓度在50%,建议加入的核酸酶的量为1:1000-5:1000,即50万-250万U/L。如果菌体浓度在5%,则可以按照1:10000-5:10000的比例加入。
2.对于细胞裂解液
可以按照106-107个细胞加入500单位核酸酶。
3.对于纯化后的腺病毒或者病毒疫苗
由于DNA含量相对较少,可以按照万分之一到万分之五也就是每毫升5个单位的最终浓度加入。
注意事项:
1.酶的最佳作用条件为pH 8.0–11.0,37°C,30min。
2.镁离子对酶活是必要的,推荐使用浓度为2mM,如样品中有DETA等金属螯合剂,需去除或加入过量镁离子。
3.酶活性比较稳定,室温放置短期内不会有太大影响,长时间保存需放置在-20°C冰箱内。酶用不含甘油缓冲液稀释后尽快使用,不推荐冻存后再使用。
4.对于仅为降低粘度为目的,可以直接加入核酸酶,室温缓慢搅拌30min。
产品货号 |
产品名称 |
产品规格 |
CYG002F0010 |
Pannarase全能核酸酶 |
100,000 U |
CYG002F0050 |
Pannarase全能核酸酶 |
500,000 U |
CYG002F0500 |
Pannarase全能核酸酶 |
5,000,000 U |
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