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高盐条件下病毒载体制备和蛋白纯化，Pannarase耐高盐核酸酶为你解忧

时间：2023-02-20 来源：上海玮驰仪器有限公司 阅读：855

核酸酶能够有效去除各种形式的DNA和RNA，是去除宿主细胞核酸（HostCell DNA，HCD）的理想手段。但来自粘质沙雷氏菌的全能核酸酶（如Pannarase、Benzonase等产品）最适Na+/ K+盐浓度在0-20mM，有效范围在0-150mM。多应用于中低盐浓度的HCD去除。

如果在病毒制备中遇到高盐条件，怎么更好的去除宿主细胞核酸？

在高盐环境下，不仅可以抑制病毒载体聚集、提升产量。因此，在有的病毒制备工艺中，常采用高盐方法进行细胞裂解来代替冻融裂解，释放的病毒载滴度上会有提升。另外，高盐环境下，核酸酶去除HCD在工艺上比一步层析或一部超滤更具效率，核酸酶做到更好的特异性，产品回收率更高，且避免了层析和超滤装置的污染。

如果在下游纯化中遇到高盐条件，怎么更好的去除宿主细胞核酸？

在下游纯化环节，如果遇到高盐洗脱的层析样品中的HCD含量偏高，需要采取相应措施，通常是在层析后再利用核酸酶去除一次HCD。然而市面上的大多数全能核酸酶并不耐盐，高盐环境下就会失活，酶切效果大大降低。因此，选择耐高盐全能核酸酶是一个比较机智的方法。

 

Pannarase耐高盐全能核酸酶

所谓“工欲善其事，必先利其器”，逐典Pannarase耐高盐全能核酸酶（SaltActive Nuclease, SAN）符合GMP要求，专门为高盐状态下样品的HCD去除设计，降低工艺难度，提升生产效率。

Pannarase耐高盐全能核酸酶作为一款无碱基偏好性的广谱全能核酸酶，在高浓度盐溶液下的耐受性更强（500MmNaCl浓度下依旧能够保持15%以上的有效酶活），能将所有类型的DNA和RNA降解为3-5个碱基片段，从而满足监管机构对病毒载体和疫苗中HCD残留的要求。

反应条件：

最适条件定义为该条件下Pannarase活性高于活性的90%；有效条件定义为特异性酶活高于推荐反应条件下的15 %酶活

 

01较宽的盐浓度应用范围

图2.Na+浓度对活性的影响（在50mM NaCl缓冲液中的酶活被定义为100%）

 

02不同pH下的活性

图3.pH对活性的影响（pH8.0的缓冲液中的酶活被定义为100%）

 

 

 

产品快速通道：

 

 

Pannarase耐高盐核酸酶-上海逐典 (chaselection.com)

 

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