细胞库建立，如何选择合适的液氮罐

根据2020版《中国药典》，细胞库的建立可为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞。

ICH Q5D中也有写到：用连续传代培养的细胞生产生物技术产品及生物制品的最大优点是每批产品都有一个经检定过的共同起源，即保存的细胞库。

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为确保生产的可持续性和产品质量的稳定，需提供检定合格、质量相同、持续稳定的细胞，相应的细胞库应当被建立，从而保证每个产品都有一个经过检定的共同起始源的细胞。

细胞库的建立

01三级细胞库管理包括原始细胞库（Primary Cell Bank, PCB）主细胞库（Master Cell Bank, MCB）和工作细胞库（Working Cell Bank, WCB）。

原始细胞库(PCB)

PCB一般建立在实验室条件下，由RCB(Research Cell Bank)复苏、扩增得到。RCB的建立需经历载体的构建、转染、细胞群的筛选、单克隆细胞株的筛选等步骤。在用于后续建库前，至少需要确保在其检测中能做到无菌生长和未检测到支原体，同时展开相应的细胞稳定性研究。

主细胞库（MCB）

主细胞库(Master Cell Bank，MCB)，原始细胞库细胞传代增殖后均匀混合成一批，定量分装，保存于液氮或-130℃以下。这些细胞须按其特定的质控要求进行全面检定，全部合格后即为主细胞库，供建立工作细胞库用。主细胞库的质量标准应高于初级细胞库。生产企业的主细胞库最多不得超过两个细胞代次。

工作细胞库（WCB）

工作细胞库的细胞由MCB细胞传代扩增制成。由MCB的细胞经传代增殖，达到一定代次水平的细胞，合并后制成一批均质细胞悬液，定量分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或-130℃以下备用，即为工作细胞库。生产企业的工作细胞库必须限定为一个细胞代次。

细胞库的管理

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• 主细胞库和工作细胞库应分别存放。每一个库应在生产设施内至少2个不同的地点或区域存放。应监测并维护细胞库冻存容器，以保证细胞库贮存在一个高度稳定的环境中。
• 非生产用细胞应与生产用细胞严格分开存放。
• 每种细胞库均应分别建立台账，详细记录放置位置、容器编号、分装及冻存数量，取用记录等。细胞库中的每支细胞均应具有细胞系/株名、代次、批号、编号、冻存日期，贮存容器的编号等信息。
• 为保证细胞冻存后仍具有良好的活力，冻存前的细胞活力应不低于90% ，冻存后应取一定量的可代表冻存全过程的冻存管复苏细胞，复苏后细胞的活力应不低于80%。二倍体细胞冻存后，应至少做一次复苏培养并连续传代至衰老期，检查不同传代水平的细胞生长情况。细胞冻存后，可通过定期复苏细胞及复苏后细胞的活力数据验证细胞在冻存及贮存条件下的稳定性。

细胞检定项目要求

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不同液氮罐的选择

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基点全自动化液氮罐

基点生物Hatch生物样本深低温全自动存储系统采用基点独创的深低温自动化技术，实现了气相液氮环境下冻存盒的快速智能存取，可显著提升样本的保存质量、存取效率和安全性，让样本库的智能化成为现实。

可以为组织、细胞、RNA、体液等生物样本的长期保存提供-180°C的深低温环境，并可在罐内-150℃环境下完成单管或整盒样本的自动化存取操作，样本存取更智慧，挑管环境更安全，应用技术更领先。

CBS隔氮型液氮罐

来自CBS的隔氮型干式储存液氮罐，隔氮技术使液氮储存安全、可靠、灵活，将液氮深低温储存性能提升到一个全新的高度，最大限度地保障样品完整性。

1, 更安全的样本存储

储存区域完全干燥，运行非常安全，操作人员不会接触液氮。

传统液氮罐口结霜以后，霜掉到罐底，影响了液位传感器的探测，忽高忽低，自动加液装置要么过充液氮，导致样本浸在液氮里，要么快没液氮也没开始充液氮。而CBS隔氮型液氮罐液位探头在隔氮层，规避了如上风险。

2，温度均一性更好：

液氮包覆层和气口，通过内表面传导和气口送气冷却样品。CBS液氮罐-隔氮型设有完全干燥的深低温储存区域，其内部平均温度为-193°C。而市面上很多液氮罐只能达到-130~-150℃。

3，CBS 小型液氮罐1500AB，2ml冻存管可存储9100支，50ml冻存袋可存储434袋，满足诸多客户对于低存储量的需求

基点高效气相罐

基点气相存储系统，存储间尽显从容。

1，免液氮自动化除雾

无需外接液氮辅助，罐口雾气随时随地一键自动清除。

2，独特的控制系统

12英寸彩色触摸屏控制系统，实时显示温度，液位，每天液氮消耗量及报警信息。

3，满足您对性价比的极致追求

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冻存和转移

CBS 2101程序降温仪基于 Windows Professional 操作系统的笔记本电脑控制器，降温速率为每分钟 0.01°C 至 99.9°C，设有六个易于运行的预设降温程序。程序性降温主要是通过微处理器控制系统和电磁阀，控制喷入腔体中的液氮量来精确控制降温速率。

CBS IntelliRate i67C可通过一次运行数千个样本来确保流程一致性，提高批次冻存通量，降低冻存成本。

• 更大的存储空间，67L腔室体积
• 强大的程序设计和控制能力
• 多种冻存架类型，满足不同样品的冻存需求

2ml冻存管2166个

50ml冻存袋104个

250ml冻存袋52个

500ml/750ml/1000ml冻存袋26个

2ml AT瓶1521个

10ml AT瓶864个

麦管272根

CryoPod便携式低温运送箱设计紧凑，轻型、便携式液氮气相存储环境，可持续控温。

<-150℃低温长达4个小时，可显示温度，日期和时间，并具有声音和视觉警报以及记录功能，适合于园区与园区，上下楼层，从程控到液氮罐，或者从液氮罐到细胞房等短距离的冷冻样本运输 。

细胞库检定

Ascend 是Revvity在第一代 Cellometer 细胞计数仪的基础上进行了全方位升级。全新设计的计数板，灵活可变的多样本检测，两种模式自动聚焦、<30s速度快速检测、超大面积图像采集可覆盖面积约为血球计数板的4-17倍等新性能，使细胞计数更准确、可靠和高效。

ELx808 光吸收酶标仪作为Lonza内毒素定量检测系统的一部分，经过了充分的验证，专用于Kinetic-QCL™动态显色法、PYROGENT™-5000动态浊度法LAL试剂盒，可以与WinKQCL™软件无缝对接，进行样品检测和数据分析，可用于QC放行检测。

PyroWave 荧光酶标仪用于重组C因子内毒素检测，与PyroGenrFC终点荧光试剂盒完美搭配，与WinKQCL™软件无缝结合，采用380/440nm的激发/发射波长进行内毒素定量检测。

MycoAlert支原体检测试剂盒除细胞培养上清外，还可以检测血清，未使用过的培养基，培养基补充物等。此外其操作简单、检测迅速、通用性高、特异性强的特点，已帮助很多实验室建立了细胞株监测体系以预防支原体污染。