利用Beacon®平台革新双特异性抗体制造

双特异性抗体

新型疗法，方兴未艾

双特异性抗体（bsAbs）作为一种创新的治疗方式，在制药领域正迅速崭露头角。虽然单克隆抗体（mAbs）在过去几十年里一直是生物制剂领域的主导力量，但bsAbs通过同时针对两种不同的抗原，提供了一种全新的治疗机制。这种独特的能力开辟了新的治疗途径，尤其是在癌症免疫治疗和自身免疫性疾病等领域显示出巨大潜力。

从2021年到2023年，双特异性抗体的批准数量显著增加。在2021年之前，全球仅有三种bsAb获得批准。然而，从2021年到2023年，新增了11种bsAb疗法，使得获批的bsAb疗法名单不断扩充（参见图1）。

图1.过去几年中，经监管机构批准并投放市场的bsAb数量大幅增加[1]。

然而，开发这些复杂分子带来了独特的挑战，特别是在确保细胞株开发 (CLD) 期间的质量和产量方面。传统的CLD工作流程通常会忽略测量关键的质量属性，例如正确的异二聚体浓度，或者直到克隆后数月才进行测量。最近的一项行业调查发现，只有12%的CLD团队在将克隆推进到搅拌培养阶段之前评估产品质量[2]。这种延迟的质量评估增加了推进劣质克隆的风险，导致成本增加和资源浪费。

Beacon®平台：CLD的游戏规则改变者

Beacon®平台已成为应对这些挑战的先进集成解决方案。其核心技术利用光电定位 (OEP) 来操纵细胞和微珠，从而将单克隆精确地移动进入NanoPen®纳升小室中进行实时分析。

这些NanoPen®小室是平台的核心。每个小室在微尺度下运行，可容纳不到两纳升的液体。如此小的体积创造了一个高度浓缩的环境，可以更快、更准确地检测分泌抗体，包括bsAbs。例如，传统微孔板中需要数周时间的测量，在Beacon®系统上可以在几小时到几天内完成。

此外，该平台还可精确控制流体条件（例如pH、温度和培养基成分），从而更接近生物反应器环境。NanoPen®小室独特的层流特性可确保扩散（而不是湍流混合）驱动分子的交换，从而实现高度可控且可靠的测定[3]。

Beacon®平台测定双特异性抗体

Beacon®平台的主要优势之一是能够高精度地筛选bsAbs。对于需要特定结合率（例如两个不同结合域的比率为1:1）的双特异性分子，尽早识别具有正确异二聚体浓度的克隆至关重要。使用Beacon®平台，您可以测量扩散梯度 (DiGr) 信号，该参数与抗体产率直接相关。

与GSK和Incyte等行业领导者的合作证明了这种方法的有效性。在与GSK的一项研究中，使用 Beacon®平台测量了13个不同的克隆，并与高效液相色谱 (HPLC) 分析进行了比较。结果显示相关系数为0.99，证实了该平台双特异性测量的准确性。

图2. HPLC分析证实，使用双特异性异二聚体测定法选择的克隆分泌出预期的异二聚体百分比。克隆按颜色分为四个簇，代表不同纯度的双特异性异二聚体分子。A) 抗原测定的散点图突出显示了为 AMBR 发酵选择的克隆的分布（三角形）。绿色虚线表示校准后的Pen Score比率为1。B) 校准后的Pen Score比率与发酵培养物测量的异二聚体百分比的散点图。

同样，在与Incyte的合作中，结果也反映了这些出色的预测结果。为了进一步了解这些功能，Incyte 的Shu Wang博士在最近的网络研讨会上分享了深入的分析，为bsAb测量提供了宝贵的观点。

SpotLight试剂：简化bsAb检测

2023年，布鲁克细胞分析事业部推出了SpotLight Human Lambda试剂，进一步简化了Beacon®平台上的bsAb测量。这一新增功能允许使用布鲁克细胞分析公司提供的现成试剂对具有Kappa和Lambda轻链的抗体进行bsAb检测[4]（图3）。

图 3. SpotLight Human Lambda拓宽SpotLight试剂列表，让bsAbs的检测更加方便。使用SpotLight Human Kappa和Lambda试剂的方法无需开发定制试剂来结合每条轻链，而是为具有兼容分子设计的 bsAbs测量提供了现成的解决方案。

通过使用SpotLight Human Kappa和SpotLight Human Lambda试剂，用户可以进行比率分析以确定每个结合域的浓度。这种早期筛选可以在单细胞克隆后的几天内识别出产量最高、质量最高的克隆，替代通常需要数周或数月的传统工作流程。

结论

Beacon®平台正在彻底改变双特异性抗体的开发。通过加快从转染到最佳克隆鉴定的时间线，研究人员现在可以在过程早期测量异二聚体浓度等关键质量属性。此功能不仅降低了成本和开发时间，还提高了开发高质量、高产克隆的可能性，使 Beacon®平台成为不断发展的双特异性抗体治疗领域不可或缺的工具。