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转染方法怎么选
LONZA
▲转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。《分子克隆实验指南》将转染(Transfection)定义为:“将外源基因导入哺乳动物细胞的一系列技术的统称”,实践中细胞转染是指将外源分子如DNA、RNA、蛋白等生物活性分子导入真核细胞的技术。
▲按照原理来分类
细胞转染的方式可以分为3类:化学法、物理法和生物介导方法。电转染作为具有代表性的物理方法转染,出现于1982年,作为通用、易用的细胞转染方法,具有其他方法无法比拟的优势,如重复性好、适用范围广等特点,在一定条件下兼得电转效率和细胞活率,尤其对目前对原代细胞和一般认为难转染的细胞有较好的转染效率。
▲各转染方法优缺点整理
01
Nucleofector™技术
▲Nucleofector™技术
随着系统生物学与交义学科方法的应用,要求细胞和系统模型越来越接近体内细胞的功能。这就意味着将来的细胞转染多数会是原代细胞的转染。而传统的方法很难成功转染原代细胞。另外即使使用细胞系做为系统模型,传统的方法也难重复出好的细胞转染效率与成活率。Nucleofector技术就从根本上解决这个问题,无论是原代细胞、干细胞、还是细胞系,它每次都可重复出很高的转染效率。
▲原理
Nucleofection”技术是利用电击在细胞膜上开个小孔,综合各种特定细胞转染程序与转染液的作用,核酸底物不仅可以进入细胞质,还可直接通过核膜进入细胞核。这使得细胞最高转染可达99%,而且实现转染不依赖于细胞的分裂。
▲优势
与其他电转方法相比,4D-Nucleofector™核转系统,除了Lonza所研发的适用于不同实验目的的电转仪设备之外,还配套不同细胞专属的电转试剂。该系统改进了传统金属电极材质的电极杯,通过高分子导电聚合物稳定电脉冲发生的过程,避免金属离子释放对细胞带来的毒性。操作简单灵活、通量多元化、还有保护细胞功能贴壁转染模块(Y模块)无需消化就可转染,更好的保护细胞功能,特别适用于发育到后期的神经元转染。
02
4D-Nucleofector核转染系统
▲Lonza 4D Nucleofector™平台从实际需求出发,开发了从低通量到高通量,小体积到大体积的电转染,研发到生产规模的设备型号,保证从小体系筛选到大规模电转的可行性和放大工艺可转移。包括如下功能模块并匹配对应应用方向:
▲只需5步简单的操作方案,实现轻松电转!!!
▲4D-Nucleofector™ 核转系统,除了电转仪设备本身之外,还有不同细胞专属的电转试剂,可以支持在不同类型的细胞中都可以实现高效的,同时维持细胞功能的转染结果。该系统改进了传统金属电极材质的电极杯,通过一种专利技术利用高分子导电聚合物稳定电脉冲发生的过程,避免金属离子释放对细胞本身带来的金属离子毒性影响。在Lonza Bioscience官网Knowledge Center里面呈现了超过700种即用型protocol(包括细胞培养,传代、电转准备、电转方案、孵育方法以及优化方案)及海量的资料和应用FAQ(且一直在实际各地技术团队的协作下不断更新)。
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