应用趋势：Lonza384孔Nucleofector电转平台在快速新冠研究/阵列CRISPR筛选/siRNA筛选脑瘤药物靶点案例

自2020年CRISPR技术摘下诺奖桂冠以来，该领域的热度不断攀升；不过siRNA筛选仍是当前使用为广泛的基因筛选方法。

丹麦癌症协会研究中心的研究人员基于Lonza 384-well Nucleofector™ 系统进行了高通量siRNA文库筛选，采用的siRNA库包含296个基因靶点，阳性对照（INCENP9）和阴性对照(siRNA的加扰对照)，每个基因设计了3个independent siRNA。

基于此，研究人员发现了胶质母细胞瘤的潜在靶点——SPT6，并证实了SPT6丢失诱导的DNA双链断裂（DSB）是胶质母细胞瘤特异性的。该研究于2020年9月发布在Nature Communications上。

除了高通量的基因筛选外，Lonza 384-well Nucleofector™ 系统对于难转染的细胞（例如原代细胞），还有着更多优势。

区别于细胞系，原代细胞具有正常细胞的形态，可更真实体现出细胞在生物体内的功能。然而原代细胞较难转染，如果使用脂质体或传统电转，转染效率往往较低。病毒转染也存在一些挑战，比如耗时长、包装尺寸有限、生物安全问题等。而Lonza 384-well Nucleofector™ 系统可以对不分裂的原代细胞进行高效的转染。

阿斯利康的科学家们采用了原代细胞Lonza IPF肺成纤维细胞，探索了IPF的关键疾病驱动机制。研究中，Lonza 384-well Nucleofector™ 系统成功对原代健康人类肺成纤维细胞的第2代细胞进行了CRISPR-Cas9 RNP电穿孔。

研究结果证明了PPP1R15A在调节肺间充质细胞中的主要作用，并且提示了特发性肺纤维化的一种新治疗策略。该研究于2021年11月3日在scientific reports上发表。

CRISPR碱基编辑技术是设计细菌基因组的一种强有力的方法，不过，它的编辑仅限制于单核苷酸替换，这是该技术的一大瓶颈。

上海交通大学长聘教轨副教授童垚俊团队开发了一种基于CRISPR-Prime编辑技术的通用（无双链断裂）原核生物遗传操作工具箱，通过Lonza 384-well Nucleofector™ 系统进行高通量的多质粒电穿孔，实现了大肠杆菌的质粒和染色体的基因敲除、敲入、敲低、单碱基替换和组合编辑。该研究于2021年9月发表于Nature Communications。