CHASELECTION IL-12

IL-12 是一种异二聚体细胞因子，含 p35 和 p40 亚基，由单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞、朗格罕氏细胞、角化细胞、小胶质细胞和外周 B 细胞分泌。在人类中，p40 亚基也可以与 p19亚基结合形成 IL-23。IL-12 通过 IL-12R β1 和 IL-12R β2 组成的受体复合物传递信号。它通过诱导 NK 细胞、T 细胞和巨噬细胞分泌 IFN -γ以及增强 NK 细胞和 T 细胞介导的细胞毒性来促进 Th1 免疫反应。一般情况下也与IL-18 协同产生 Th1 记忆细胞。

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Q&A

应用文献

别名(synonym)：白介素 12，Interleukin-12, NKSF, CTL Maturation Factor (TCMF), Cytotoxic Lymphocyte Maturation Factor (CLMF), TSF

来源(Source)：CHO cells

蛋白结构（Structure):该蛋白不含标签，编号:p35: P29459 p40: P29460，基因 ID:p35: 3592 p40: 3593

氨基酸序列：p35 Subunit:RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKA RQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLEL TKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCL SSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLD QNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFY KTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

p40 Subunit:IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPE EDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQ YTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQ KEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLT FSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKE YEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLK YENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEV SWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKK DRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWS EWASVPCS

分子量大小(MW):约 75kD，含 306 氨基酸的 p40 亚基和 197 氨基酸的 p35 亚基

纯度（Purity):≥95 % （SDS-PAGE & HPLC）

SDS-PAGE

重组人 IL-12 在还原(R)条件下用 SDS-PAGE 分离，在 40和 35kDa 处显示 R 带，分别对应于 P40 和 P35 的亚基分子量

内毒素含量（Endotoxin）：< 0.1 EU/μg

制剂(Formulation)：PBS pH7.4，0.2μm 滤膜过滤除菌

活性检测（Biological Activity）:

使用 PHA 激活的人 T 淋巴母细胞进行细胞增殖试验，ED50≤0.05 ng/mL ，对应于≥ 2.0 × 10^7 单位/mg 的比活性

产品复溶(Reconstitution)：

1. 打开前请短暂离心，将内容物离心至底部；

2. 建议初始溶于无菌去离子水至适当浓度（建议浓度 0.1-1mg/ml)；

3. 如需储存以上储存液，需分装成小量等份（不小于 20μl)，如需进一步稀释，需溶于含有载体蛋白的合适缓冲液储存。

储存与运输(Storage)：

如需长期储存，本品应贮存于≤-20℃，请避免重复冻融。

1. ≤-20℃储存，干粉可保存至少 24 个月;

2. 复溶后，无菌条件下于 2 ~ 8℃可保存 1 个月;

3. 复溶后，无菌条件下于-20 ~ -70°C 可保存 3 个月。

订货信息

产品货号	产品名称	级别	产品规格
CY071F0010	IL-12	科研级	10μg
CY071F0020	IL-12	科研级	20μg
CY071F0050	IL-12	科研级	50μg
CYG071F0050	IL-12	GMP级	50μg
CYG071F0500	IL-12	GMP级	500μg

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上海逐典生物科技有限公司，坐落于中国(上海)自由贸易试验区，获得ISO9001质量体系认证，是一家专业从事重组蛋白研发和销售的高新科技企业。

逐典生物始终秉持以客户为中心的理念，针对重组蛋白的结构设计、纯化工艺及其稳定剂型相关的多项关键技术进行攻关和突破。独特的定向蛋白变复性技术，可将大肠杆菌大量表达的变性固体蛋白转变成高活性可溶性蛋白。凭借技术优势，新品研发周期短且可控性强，为重组蛋白的高质高效研发提供保障，为企业生产降本增效。

公司自成立以来成功开发30余种高活性细胞因子及多种高活性蛋白酶，覆盖细胞培养、病毒纯化以及质量分析等生物工艺各个环节。可广泛应用于科研、医药生产及IVD（体外诊断试剂）等领域，满足各类用户所需。

Q: 细胞因子是什么
A: 细胞因子(cytokine，CK)是由多种组织细胞(主要为免疫细胞)所合成和分泌的小分子多肽或糖蛋白。细胞因子能介导细胞间的相互作用，具有多种生物学功能，如调节细胞生长、分化成熟、功能维持、调节免疫应答、参与炎症反应、创伤愈合和肿瘤消长等。

Q: 常见细胞因子及其功能
A: (1) 白细胞介素（interleukin, IL)：由淋巴细胞、单核细胞或其它非单个核细胞产生的细胞因子，在细胞间相互作用、免疫调节、造血以及炎症过程中起重要调节作用。
(2) 集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)：根据不同细胞因子刺激造血干细胞或分化不同阶段的造血细胞在半固体培养基中形成不同的细胞集落，不同CSF不仅可刺激不同发育阶段的造血干细胞和祖细胞增殖的分化，还可促进成熟细胞的功能。
(3) 干扰素（interferon, IFN)各种不同的IFN生物学活性基本相同，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。
(4) 肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF)：两类TNF基本的生物学活性相似，除具有杀伤肿瘤细胞外，还有免疫调节、参与发热和炎症的发生。大剂量TNF-α可引起恶液质，因而TNF-α又称恶液质素（cachectin)。

Q: 细胞因子冻干产品使用注意事项
A: 冻干粉产品在运输过程中会有粉末黏在管壁或盖上，使用前请勿开盖并离心处理 20-30 秒（高速离心机，约13000 rpm），使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。亦可使用最高转速为4000-4500rpm的离心机离心5分钟（3000-3500rpm），也能达到类似的效果。虽然有时管中蛋白粉末不可见或者可视数量很少，我们的质控体系保证每管中所含的蛋白量是准确且足量的。

Q: 细胞因子冻干产品的溶解
A: (1) 使用前准备：使用前先离心（见上文），使附于管盖或管壁的蛋白沉于管底；
(2) 溶解液
① 要求用无菌去离子水溶解的产品，务必不可用盐溶液，避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出；不可用PBS或培养液（1640或DMEM等）直接溶解，否则蛋白可能无法完全溶解，从而导致蛋白活性不足或失活；
② 要求用盐溶液溶解的产品，请依照说明书上的浓度，同样也是为了避免过高的盐浓度；
③ 亦可联系我们的技术支持获得关于单独产品的溶解液的选择。
(3) 溶解到指定的浓度：
① 我们建议最佳浓度一般不低于100 μg/mL，如10μg的冻干粉，则加入10 μL-100μL的溶解液；
② 高于或低于最佳浓度，细胞因子可能会不稳定，或者聚集，导致部分蛋白沉淀，影响其活性。高于这个浓度范围，可能会超过该蛋白的最大溶解浓度，即蛋白无法完全溶解；
③ 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心数秒；溶解时不可振荡，避免因化学键的断裂造成蛋白失活；
④ 将溶解后的蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。建议将不易溶解的蛋白用低速摇床促进其溶解。
(4) 溶解后的保存：
不建议用推荐的溶解液做进一步稀释。溶液中的蛋白很容易黏附在冻存管壁，且很难与管壁分离。使用含有载体蛋白的溶液（该溶液通常是指pH近中性，有一定缓冲能力的缓冲液，如PBS，培养液等）预先封闭塑料管壁上的蛋白结合位点，使细胞因子或重组蛋白不会黏于管壁，方可更好地保存蛋白溶液；
① 短期保存：在一般情况下，上文中建议的浓度是较高的。我们建议将该溶液用含载体蛋白（如0.1% BSA、10% FBS、5% HSA）的溶液进行稀释，分装存于4℃并于一周内用完，分装体积不要小于20μL。否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上，使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降，从而影响其生物活性；
② 长期保存：若配置的溶液无法一次用尽，我们建议用含载体蛋白（如0.1% BSA、10% FBS、5% HSA）的溶液进一步稀释，分装冻存于-20℃至-80℃，分装体积不要小于20 μL；
① 在做无血清培养或动物的体内实验时，细胞因子中不能含有BSA，FBS或HSA等动物或人的成分，可用含5%海藻糖（Trehalose）的溶液来稀释已溶解的细胞因子或重组蛋白，然后分装冻存，分装体积不要小于20μL。

Q: 重组蛋白的检测都有哪些？
A: 基因序列：经N端序列分析。必要时，使用SDS-PAGE，HPLC和质谱分析等方法与标准品进行比对；
蛋白纯度：
(1) 经SDS-PAGE
(2) HPLC分析
生物活性：经相关的体外或体内生物活性检测，详见下文；
蛋白含量：
(1) 紫外分光光度
(2) BCA蛋白定量测定
(3) SDS-PAGE分析
(4) HPLC法与标准品比对
内毒素含量：经动态LAL（西方鲎试剂）法或TAL（东方鲎试剂）法测定；
无菌：所有蛋白溶液在分装冻干前经0.22μm滤膜过滤除菌，在B+A级环境分装、冻干及封盖；

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