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盐耐受全能核酸酶(Salt Active Nuclease, SAN)是一种重组非特异性核酸内切酶,与全能核酸酶相比,具有较高盐浓度耐受,广泛应用于生产工艺流程中高盐环境下核酸(包括双链和单链DNA和RNA)污染去除。
检测数据:
1.耐盐曲线
当盐离子浓度在600~700mM时,Chaselection初代全能核酸酶几近失活,而SAN仍能保持较高活性。
主要用途:
1.疫苗和病毒样品制备中高盐环境下DNA污染的去除
5.有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响,改善蛋白质分离效果,增强2-DE分辨率
产品货号 |
产品名称 |
级别 |
产品规格 |
CY070F0010 |
耐高盐全能核酸酶(SAN),更高盐耐受型 |
科研级 |
100 kU |
CY070F0050 |
耐高盐全能核酸酶(SAN),更高盐耐受型 |
科研级 |
500 kU |
CYG070F0010 |
耐高盐全能核酸酶(SAN),更高盐耐受型 |
GMP级 |
100 kU |
CYG070F0050 |
耐高盐全能核酸酶(SAN),更高盐耐受型 |
GMP级 |
500 kU |
CYG070F0500 |
耐高盐全能核酸酶(SAN),更高盐耐受型 |
GMP级 |
5000 kU |
Q:使用后如何灭活或去除耐高盐全能核酸酶?
A:由于SAN的等电点很高(9.6),可以很容易地用离子交换色谱法去除酶。热灭活不是很有效。在70°C时,SAN的半衰期约为2小时,但SAN易受还原剂的影响,这些还原剂如DTT或TCEP可以增强酶的热失活。加入螯合剂也会抑制SAN活性。
Q:耐高盐全能核酸酶是否可以用于病毒载体的纯化,例如基于AAV的载体?
A:是的,这种内切酶适合用于病毒载体的纯化。病毒载体的纯度在细胞或动物的体内转导之前至关重要。盐通常是通过最小化聚集和增加目标产量来实现高度纯化载体的重要组成部分。SAN高质量与使用高盐条件高度兼容。
Q:与非盐活性核酸酶相比,耐高盐活性SAN的优点和缺点是什么?
A:许多蛋白质缓冲液含有高浓度的盐,以便从蛋白质中释放DNA。与其他核酸酶相比,SAN在高盐浓度下具有最佳活性。因为最优活动依赖于盐,所以在待检测样品中盐含量非常少的情况下,SAN的活性可能不高。
Q:SAN 在含有0.1% Triton® X-100的溶液中具有活性吗?
A:是的。不过活性会降低至正常活性的70%。在0.5% Triton® 中,将几乎没有活性。
Q: SAN在含有10%甘油的缓冲液中有活性吗?
A:有活性,但是活性降低了,约为与不含甘油样品的80%活性。在50%的甘油溶液中,几乎没有活性。
Q:可以用SAN替代Benzonase的所有应用场景吗?
A:在需要在高盐缓冲液中作用的非特异性核酸酶的应用中,SAN可以代替Benzonase。
Q:如何较为直观的判断SAN是否发挥作用?
A:随着SAN降解DNA和RNA,细胞裂解液在视觉上变得不那么粘稠。任何核酸检测方法都可以用于检测核酸的消化效果。
Q:SAN 的最低反应温度是多少?
A:最佳反应温度为37℃。SAN在低温下也很活跃,但反应会慢一些。4℃时的活性约为37℃时活性的5-10%。这可以通过增加反应时间或在反应中使用的酶的量来补偿。
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