抗体药早研周期长？！均相检测技术来 “救场”！

在抗体药早期研发阶段，需要从抗体库中筛选出能特异性结合目标抗原且亲和力较高的抗体，经过一系列体外功能活性测定等对抗体进一步筛选，并进行优化，最终获得候选抗体。在抗体发现阶段，一般会从几千个样本中筛选出600-1000个与抗原有结合活性的抗体，经过初步筛选和成药性评估后，得到10-20个候选抗体，然后再进行体外功能活性检测，整个过程耗时约3-5个月。

从抗体药发现到体外活性检测会涉及到大量的ELISA实验，不仅耗时而且耗力，瑞孚迪HTRF和AlphaLISA均相免洗平台，提供抗体药物研发不同阶段的高通量检测试剂，帮您准确、快速地完成多样本的检测。与ELISA相比，均相免洗技术省去了包被、洗板、显色等步骤，只需要加样-孵育-检测，即可完成整个实验，可节省您80%以上的人工和操作时间，也适用于自动化高通量设备。

一、抗体筛选和优化

抗体筛选是抗体发现中的重要环节，对抗体发现的结果起到关键作用。在筛选早期，选择合适的高通量筛选技术显得尤为重要。

针对抗体的筛选和优化，瑞孚迪提供一系列杂交瘤检测试剂盒、阻断性抗体和功能性抗体筛选试剂盒、抗体定量检测试剂盒以及toolbox，满足各种蛋白互作检测、抗体含量检测及亲和力检测的需求。

技术优势：

• 实现高通量的抗体筛选：实验仅需加样-孵育-检测，2h即可完成
• 阳性检出率更高：无需洗板，对于一些低亲和力的阳性抗体，其检出率更高
• 节省样本：反应体系仅需20 ul，适合珍贵样本的检测

以Hybridoma binding kit (6HIS antigen)为例，该试剂盒使用夹心法检测与6HIS标记抗原结合的小鼠杂交瘤上清液，试剂盒含有Eu供体标记的抗6HIS抗体和用D2受体标记的抗小鼠抗体，当样本中杂交瘤克隆产生的小鼠抗体与6HIS标记的靶标结合时，产生HTRF信号，信号强度与小鼠杂交瘤抗体浓度成正比，原理如图1所示。

图1. Hybridoma binding kit (6HIS antigen)反应原理

① 杂交瘤检测试剂盒（部分）

② 抗体筛选试剂盒（部分）

③抗体含量检测试剂盒（部分）

④toolbox-自建体系

瑞孚迪PPI toolbox试剂包括Eu和Tb穴状化合物以及 XL665 和 D2 标记的抗标签抗体、抗种属抗体和链霉亲和素。您可以根据您靶点蛋白的标签以及抗体的种属/亚型等，选择合适的供体和受体对，自己搭建合适的基于HTRF/Alpha的抗体筛选模型。

二、生物学活性检测

瑞孚迪基于HTRF、Alpha均相技术平台和化学方法平台，可提供细胞表面受体结合、信号通路相关指标及杀伤活性等一系列检测试剂，多维度表征抗体药的体外生物活性，为抗体药的研发、质量控制提供重要支撑。

以cAMP Gs Dynamic Kit为例，该试剂盒基于竞争法，试剂盒含有Eu（供体）标记的特异性抗体和与D2偶联的cAMP（受体），能够检测贴壁细胞或悬浮细胞中Gs偶联受体的所有类型的化合物。细胞产生的天然cAMP与D2标记的cAMP竞争结合Eu标记的抗cAMP的抗体，从而阻断HTRF信号，样本中cAMP的含量与HTRF信号强度成反比，反应原理见图2。

图2. cAMP Gs Dynamic Kit反应原理

1. FcγR和FcRn结合活性

瑞孚迪Tag-lite®是一种基于细胞的检测方法，用于测定针对FcγR和FcRn的特异性抗体结合情况，适用于ADCC活性抗体以及更长循环半衰期的抗体，还可用于评估抗体的去岩藻糖基化程度。

产品列表 (部分)

2. C1q结合活性

人C1q结合试剂盒用于检测IgG的Fc端与人C1q 蛋白的结合情况。

3. 信号通路检测

① 第二信使检测

抗体与细胞表面受体结合后，会引发细胞内的信号转导过程，第二信使在这个过程中起着关键的传递和放大信号的作用，通过检测第二信使的水平变化，可以间接反映抗体药物的活性。

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② 磷酸化蛋白检测

瑞孚迪提供稳定便捷的HTRF&Alpha磷酸化蛋白检测试剂盒，试剂盒应用经典双抗夹心的检测模型，标记有供体和受体的特异性抗体识别磷酸化位点来检测蛋白磷酸化水平，轻松实现2小时检测磷酸化蛋白。省时，省力，灵敏度高，样本消耗少，可替代诸如蛋白质印迹法（Western Blot）、酶联免疫吸附测定（ELISA）或其他发光检测等更为传统的技术，使磷酸化蛋白检测变得更加简单高效。且提供总蛋白检测试剂盒，适合做归一化处理，进行客观的数据分析。

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③ 细胞因子检测

抗体药可通过调节免疫细胞的活性，使其分泌细胞因子来发挥作用。细胞因子是一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质，参与调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长等多种生理过程。检测细胞因子的分泌水平，可以评估抗体药对免疫系统的激活或调节作用，以及其在免疫治疗中的潜在效果。

产品列表（部分）

④ 荧光素酶报告基因检测

荧光素酶报告基因是体外研究信号通路的激活与调控的常用方法。抗体药与细胞表面受体结合后，会引发细胞内一系列信号转导通路的激活。通过构建含有荧光素酶报告基因的细胞模型，将荧光素酶基因置于待研究信号通路的关键转录因子或调控元件的下游，当抗体药作用于细胞并激活相应信号通路时，会导致荧光素酶报告基因的表达上调，进而产生可检测的荧光信号。

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4. 细胞杀伤检测

抗体药细胞杀伤检测是评估抗体药物有效性的关键环节。它主要用于衡量抗体药物对靶细胞（如肿瘤细胞、病毒感染细胞等）的杀伤能力，这对于研究抗体药的治疗潜力、筛选优化药物候选物以及理解其作用机制等方面都具有极其重要的意义。

瑞孚迪基于特有的HTRF平台、Delfia平台和化学发光平台，针对不同的检测需求，提供多种细胞杀伤检测检测试剂。

① 人Perforin-1和Granzyme B检测

人Perforin-1和Granzyme B检测试剂盒均采用HTRF均相检测法，反应原理类似，以人Perforin-1试剂盒为例，该试剂盒含有两种特异性抗人穿孔素抗体，它们分别用Eu穴状化合物（供体）和 D2（受体）进行标记。信号强度与样本中存在的穿孔素浓度成正比。

② 基于ATP的细胞活力检测

ATP广泛存在于所有活细胞中，在正常的活细胞中，ATP的含量相对稳定，当细胞受到抗体药的杀伤作用时，细胞膜完整性被破坏，细胞内的 ATP 会释放到细胞外环境中。因此，通过检测细胞培养上清或细胞裂解物中的 ATP 含量，可以反映细胞的存活状态和抗体药的细胞杀伤效果。

③ DELFIA EuTDA细胞毒性检测检测试剂盒

该试剂盒利用瑞孚迪DELFIA® 时间分辨荧光（TRF）法，检测原理与铬释放试验相同，只不过其靶细胞负载的是一种 BATDA 配体，而非 51Cr，它不需要经过特殊改造的细胞，用于测量化学细胞毒性、细胞介导的细胞毒性以及抗体依赖性细胞毒性（ADCC）。

推荐微孔板

将瑞孚迪的微孔板与Revvity的一系列检测试剂、读板机和自动化技术配对，以获得最佳的检测性能并简化工作流程。

HTRF微孔板（部分）

Alpha微孔板（部分）

推荐酶标仪

瑞孚迪VICTOR Nivo —— 一款设计紧凑、性能卓越的多功能酶标仪

VICTOR Nivo酶标仪，是一款多功能微孔板检测仪，这款多功能酶标仪功能强大、设计紧凑、操作简便，将所有最常用的检测模式置于业内最小的台式系统中。可检测可见/紫外光吸收（ABS）、化学发光（LUM）、荧光强度（FI）、荧光偏振（FP）、时间分辨荧光（TRF）、Alpha等多种模式。