Lonza 4D-核转仪器试验操作全流程攻略

很多想使用Lonza核转设备的小伙伴常常会遇到想做电转但是无从下手的情况。有些小白完全不知道怎么做，也不知道应该准备些什么。那么针对这些问题，小编上次为大家整理了一些挑选试剂盒和试验条件的攻略，如有需要请戳下方链接查看：

Lonza 4D-核转仪器试验操作全流程攻略（1）——如何选择需要的试剂盒和程序

那么接下来，给大家再介绍一下4D核转仪器的操作流程。大家可以根据以下流程去着手实验啦，有问题可以在评论区提问哦！

电穿孔是一种常用的物理转染方法。电转染是在瞬间强大电场的作用下把外源大分子物质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小分子导入细胞膜内部的一个过程。其原理为：细胞和DNA悬浮在电穿孔缓冲液中，对细胞施加高压脉冲，电脉冲在细胞膜上产生电位差，使膜产生了一定的通透性，以便DNA进入。电转染是一种非常普遍且高效的转染方法，可用于几乎所有的细胞类型的转染。

电转染整体操作简单迅速，想要做好电转试验，那么试验前后的准备工作是必不可少的，具体流程小编以文字形式整理如下，文章末附流程图。

*注：本方案为个人整理，试验具体的方案及细节请参考Lonza官网提供的Protocol。

实验准备

我们需要根据官网的细胞信息确定我们的细胞适合的程序代码、细胞数、试剂盒等相关信息。

在试验前，需要根据试验的样品数量准备试剂耗材、其中用来后续使用的培养基和培养板需要进行37℃进行预热。

将试剂盒孵育至室温，并将试剂盒内的solution与supplement按照4.5：1的比例混合均匀。

提前准备好对数生长期的细胞（具体培养方案可参考查到的protocol）。

将仪器开机并设置好程序。

开始实验

将细胞处理成单细胞悬液，选取所需细胞进行离心。注意消化时间与离心力。

离心过后，小心吸取上层培养基，尽量吸取干净，并用配置好的电转buffer重悬细胞。

3、加入电转底物：质粒、RNP、RNA等。并混合均匀。（RNP比质粒体积小很多，对于大质粒可以考虑RNP体系，文末附解决方案）

4、将混匀的液体加入到电转的耗材中，应该注意的是，加完的液体应该在容器底部，内部和上方没有气泡，且液面两端高度一致，与容器底物保持平行。

5、整体试验流程尽量快一些，样品检查无误后，直接上机。

实验后处理

将电转后的耗材从仪器中取出。

轻柔加入预热的培养基，混匀细胞。。

将混匀的液体加入到最终的培养板中并补全培养体系。

Lonza 电转流程