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非病毒细胞转染方法|Lonza Necleofector入核电转技术

时间：2024-11-19 来源：上海玮驰仪器有限公司 阅读：30

入/核/电/转Lonza Nucleofector

超高引用值得信赖

非病毒转染

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Nucleofector电转技术

细胞转染有许多不同的方式，常用于实验室的就是脂质体转染、病毒转染以及电穿孔法。

传统的电穿孔技术需要摸索步骤进行优化，转染位置为胞质，细胞毒性大，转染效率难以得到保证。但Lonza公司对电穿孔技术进行了优化，通过配合高效率的细胞转染液、预置的优化好的转染程序，直接将外源基因导入目标细胞，实现更高转染效率、更高细胞存活率，最快在转染2小时后就能观察到转染基因的蛋白表达。

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原理与优势

 

Nucleofector技术原理：高效的非病毒的DNA转运，适用于原代细胞或是细胞系，可直接转运入细胞核。

主要优势：

· 基因转染效率高

· 转染与细胞分裂无关

· 可实现非分裂细胞的转染，如神经元细胞

· 更快的基因表达

· 通用性：可转染质粒DNA，DNA单链，mRNA或是siRNA，可适用于原代细胞或是细胞系。

 

 

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不同转染模块

 

Core Unit：核心模块，控制系统，能够加载程序，实现细胞转染功能。

 

 

X Unit：能够实现悬浮细胞的转染，可以以20ul，100ul的体系进行转染。

 

 

Y Unit：能够实现贴壁细胞的转染，可直接在24孔板内进行转染。

 

 

96-well Unit：可在96孔板内进行检测，可应用于原代细胞以及难转染细胞。

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实验步骤简单

 

 

 

Step 1：将目标细胞从培养皿或培养瓶中收集起来。

 

 

 

 

Step 2：将细胞与转染试剂、需转入的物质（DNA或siRNA）混匀，并转入电极杯中。

 

 

 

 

Step 3：选择合适的程序，将电极杯或电极条插入仪器中，按下Start按钮。

 

 

 

 

Step 4：用培养基冲洗，将细胞冲洗下来

 

 

 

Step 5：将冲洗后的培养基转移至培养皿中，在一定时间后即可检测转染效率。

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基因表达快速

 

 

 

 

 

 

TMR标记的DNA表达eGFP的质粒转染新生儿皮肤成纤维细胞（NHDF-neo)，两小时后用 3.5%PFA固定，共聚焦显微镜可观察到GFP蛋白在细胞核内表达。

05

 

应用领域多样

 

 

 

 

 

免疫、肿瘤、代谢、神经等研究领域的不同细胞，难以进行转染的细胞、无法分裂的细胞，都可以实施转染。

06提供多种工具

 

 

 

从转染方法到细胞培养知识，不同的转染细胞种类，适用的不同转染方法，都能在Lonza官网找到答案。

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