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传统的转染技术无法有效转染许多常用于细胞疗法的细胞类型,如原代T细胞。而电穿孔是一种强大的转染工具,它利用电脉冲瞬时增加细胞膜的通透性,使裸物质(如DNA/RNA、蛋白质等)短时大量进入细胞完成载体递送,以更低成本、更灵活高效和更安全可持续的优势,成为非病毒载体转染中极具前景的新兴技术之一。
然而你真的了解电穿孔技术吗
RegMedNet所推出的电穿孔工具书中邀请到了Arsenal Biosciences的联合创始人Theodore Roth和Lonza细胞工程研发主管Ludger Altrogge,重点回答了六道精华问题。
Theodore Roth
Arsenal Biosciences
联合创始人
Ludger Altrogge
Lonza细胞工程研发主管
Interview
超越障碍:
关于非病毒转染的访谈
Q1
Ludger, 电穿孔等非病毒方法在基因修饰方面的优势在哪里?
非病毒方法在使用的货物/底物类型方面具有灵活性。例如,它不能只传递核酸(DNA、mRNA),也不能传递蛋白质,如用于CRISPR基因编辑的Cas9 RNPs。非病毒方法既适用于治疗基因的瞬时表达,也适用于细胞的稳定遗传工程。前者可以通过通过传递mRNA或DNA(质粒、而转座酶系统(如睡美人或 PiggyBac)以及用于定向整合的工程化核酸酶(如CRISPR)可实现稳定的细胞基因工程。基于病毒和转座酶的改造通常更有效,但由于整合在基因组中随机发生,因此可控性较差。将工程化的核酸酶作为重组的RNPs运送,可以更好地控制修饰的剂量。
Q2
Theo,你是如何在实验室中使用电穿孔技术的?
Q3
Ludger,你能详细介绍一下龙沙提供的非病毒基因转移技术吗?
Q4
Theo,在你看来,使用Nucleofector™技术进行CRISPR/Cas9介导的基因组编辑有哪些优势?
Q5
Theo,你们也进行 CRISPR 筛选吗?
Q6
Theo,您认为核转染技术在治疗方法和药物开发中的应用前景如何?
除此之外,更有以下内容免费分享给大家。
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