今年我们非常荣幸请到圣裘德儿童研究医院Dr.Jessica Wagner和福克斯詹士癌症中心的 Dr.Harvey Hensley为大家分享:使用分子影像技术在体内和体外水平揭示小分子药物 ONC201的抗肿瘤活性和免疫刺激作用。以下是报告的精彩内容:
ONC201背景介绍
在2013年以前,美国滨州州立大学(PennState University)和滨州赫尔歇医疗中心(Penn State Hershey MedicalCenter)的研究人员,通过筛选 NCI的免费分子库得到是一种高效的 抗癌分子,即ONC201 (又称TIC10或NSC350625)。
在2013年,Allen实验室发表的文章中显示,TIC10,也就是ONC201可以诱导肿瘤细胞 TRALL(重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)的水平,对激酶AKT和MEK实施双重 抑制,导致转录因子FOXO3a去磷酸化,去磷酸化的FOXO3a发生从细胞质进入细胞核的 易位作用,在核内结合编码基因TRAIL的启动子上调其转录。同时在活体实验中显示出 单次剂量的有效性、令人欣喜的安全性和药代动力学。
Joshua E. Allen et al. Sci Transl Med 5, 171ra17 (2013);
在多个细胞系模型和包括结肠癌、乳腺癌和脑瘤等异种移植实体瘤模型中,发现ONC201 通过诱导TRAIL介导而引发的细胞凋亡促进肿瘤消退。此外,ONC201还表现出了较好的 药物特性,如稳定性好,口服生物利用度高和良好的血-脑屏障通透性。目前ONC201正 在各种恶性肿瘤中进行早期临床试验测试。
在2016年kline实验室发表的论文中,证实ONC201上调死亡受体DR5和ISR(整合应激 反应)进行肿瘤的杀伤。同时,ONC201通过双重阻碍Akt和ERK,从而释放Foxo3a进入 核并且激活TRAIL基因的转录,从而上调内源性TRAIL表达Dr.Jessica Wagner 实验室发现 ONC201通过类似于细胞效应引发的压力信号诱导eIF2-a-依 赖的活性转录因子ATF4和CHOP,增加DR5的表达,诱导细胞死亡。
研究正文
Dr.Jessica Wagner 在 2018年发表在 JCI杂志上的文章中,主要证实了以下三个结论。
模型选择
为了证实以上结论,Dr.Jessica Wagner采用了几种动物模型,小鼠皮下肿瘤模型、原位接 种模型及肿瘤转移模型。在转移模型中发现,Vehicle 组的小鼠在肺部出现四个转移位点, 在ONC201治疗组并未发现转移位点。
小鼠肿瘤转移模型
检测方法
在这篇文章中,大量采用Revvity公司的影像系统来监测肿瘤的生长和转移,使用小 动物活体成像平台及多光谱成像系统监测生物发光信号和 GFP 的荧光信号。使用 IVIS系统进行生物发光成像,可以非常容易监测皮下和原位肿瘤的生长。
实验结果
1. 增加ONC201 剂量能够抑制肿瘤的生长和转移
ONC201 对肿瘤的生长和转移的抑制作用具有剂量依赖性。加入每3周一次的注射 频率在临床是耐受的,临床前实验提示证实,通过剂量增强可以增加ONC201的抗 肿瘤效果。文章发现,在结肠癌HCT116 p53–/–, HT29, 和乳腺癌MDA-MB-231模型 中,增加ONC201剂量,治疗效果显著增强。
同样Dr.Jessica Wagner2018年发表在JECCR的文章中,使用荧光成像观察HCT116 –GFP肿瘤,并 使用探针superhance 680 观察肿瘤血管影像,从肿瘤的影像可以看出,Vehicle处理组肿瘤内部具有 丰富的血流,ONC201处理组并没有大量的减少血管的量,而血管靶向药物Bevacizumab明显的减少 肿瘤血管的数量。这些结果提示我们可以将ONC201和抗血管类的药物联合使用进行肿瘤治疗。
生物发光检测转移位点
使用IVIS系统对解剖后肝脏及肺部的转移位点进行生物发光的成像,MDA-MB-231转移模 型中,可以看出ONC201治疗组的肿瘤明显小于对照组,并且发生率也低于对照组,甚至 25mg/kg4周注射一次,都能达到治疗效果。
荧光成像检测转移位点
手术去除原位肿瘤(HCT116GFP),在转移性形成时给予治疗vehicle 或100 mg/kg ONC201,测量最后转移肿瘤的数量和大小。从图中可以看出转移位点出现在结肠和肝脏 的位置。ONC201治疗组可以明显减少肿瘤的转移。
Micro CT成像技术检测转移位点
进一步使用Revvity公司Quantum Micro CT系统检测ONC201在小鼠转移模型中的抗转移的 效果。使用HT29尾静脉注射模型,经过ONC201或Vehicle治疗后,可以看到ONC201 可以 减小肺部转移位点的体积,而Vehicle处理组肿瘤在持续生长。
组织定量病理成像
使用Vectra全自动定量病理系统结合Inform软件对IHC组织进行成像和分析,检测微弱表达 的生物标志物。Inform软件具有自学习功能,通过训练可以快速的区分肿瘤实质、间质及 其他区域,并且进行定量。我们选用MDA-MB-231细胞系及MDA-MB-231shTRAIL细胞, 接种在小鼠体内。Vehicle 或ONC201治疗四周后,每个肿瘤组织取两张切片使用Vectra系 统进行扫描,整张切片使用Inform进行分析。有趣的是,在野生型肿瘤模型中,Vehicle 或 ONC201治疗组cleaved caspase-3表达有轻微的区别,而Ki-67+ 细胞的数量相差很大。 shTRAIL tumors模型中并没有明显的变化。这些结果说明ONC201对肿瘤转移的抑制作用 至少部分是TRAIL-依赖途径下调肿瘤细胞的迁移和入侵的方法实现的。
参考文献:
1. Jessica Wagner et al., Dose intensification of TRAIL-inducing ONC201 inhibits metastasis and promotes intratumoral NK cell recruitment J Clin Invest. 2018;128(6):2325-2338.
2. Jessica Wagner et al. Anti-tumor effects of ONC201 in combination with VEGF-inhibitors significantly impacts colorectal cancer growth and survival in vivo through complementary non overlapping mechanisms Journal of Experimental & Clinical Cancer Research (2018) 37:11.
3. Allen JE, et al. Dual inactivation of Akt and ERK by TIC10 signals Foxo3a nuclear translocation,TRAIL gene induction, and potent antitumor effects. Sci Transl Med. 2013;5(171):171ra17.
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