应用说明 | Beacon®单细胞光导平台探索抗体发现的物种多样性

在不断发展的生物制药和生命科学研究领域，寻找具有独特特性的新抗体至关重要。筛选不同动物物种的原代B细胞的能力将扩大回收抗体序列的多样性，并能够提升为治疗、检测试剂和基础研究的不同应用找到最佳抗体的几率。然而挖掘这些物种的抗体潜能一直具有挑战性。在最新发布的应用说明中，我们概述了布鲁克Beacon®单细胞光导系统和Opto® B Discovery产品组合如何提供一种快速筛选不同物种原代B细胞的新方法。

Opto® Memory B Discovery Workflow

Beacon®单细胞光导系统上的Opto® B Discovery 产品组合能够在一周内对来自小鼠、人类和兔子原代样品的B细胞进行功能筛选，从而快速选择先导分子。将布鲁克现有的 Beacon®单细胞光导系统与现已上市的Opto® Memory B Discovery试剂盒结合使用，可降低任何新物种的BCR全部成分的进入门槛，因为多种培养基配方已经过优化，可支持不同动物的B细胞激活和存活，并且许多现成试剂可用于B细胞富集和筛选（图1）。

图1. Opto Memory B Discovery工作流程可在一周内快速分离和激活记忆B细胞、功能优先的单B细胞筛选以及单克隆抗体序列的回收。

在不断发展的生物制剂领域，找到具有独特特性的新抗体至关重要。在不同动物物种中筛选原代B细胞的能力扩大了回收的抗体序列的多样性，并增加了在治疗抗体、试剂抗体和基础健康研究的多种应用领域找到最佳抗体的可能性。然而，挖掘这些物种的抗体潜力一直具有挑战性。

Opto® Memory B Discovery样品制备试剂盒能够激活来自各种组织的记忆B细胞，包括新鲜外周血、整个器官（例如脾和淋巴结）和冷冻保存的PBMC，可实现人类和兔子记忆B细胞的稳健、无饲养层激活（图2），然后进行芯片上测定筛选和下游序列回收。提供了一种快速筛选不同物种的原代B细胞的新方法。

图2. 从血液或脾脏样本中分离记忆B细胞，用Opto® Memory B Discovery样品制备试剂盒（人或兔）激活，以产生适合筛选的抗体分泌细胞

我们最新的应用说明深入探讨了这些试剂盒的适用性，证明了它们与来自小鼠、大鼠、羊驼、鸡、牛、山羊和绵羊组织的记忆B细胞的兼容性。通过系统实验，我们成功激活并筛选了来自相容物种的B细胞，从而通过下一代测序回收目标抗体序列。我们还探索了记忆B细胞分离和激活的过程，展示了我们专有的无饲养层培养基的效率和培养四小时后仍然能分泌IgG抗体的比例（图3）。

图3. 活化B细胞在芯片上加载4小时后继续分泌IgG抗体的比例。

总体而言，我们证明人类和兔的Opto® Memory B Discovery试剂配方与小鼠、大鼠、羊驼、山羊和绵羊B细胞兼容，但是针对牛或鸡B细胞的激活仍然需要优化。利用Beacon®系统的高通量能力，我们分离并筛选了数千到上万个单个B细胞，加速抗体发现过程。虽然有些物种的抗体发现流程仍然需要提升，我们的发现为进一步优化奠定了基础。

在这篇应用说明中除了为小鼠、人和兔单B细胞筛选提供完全优化的端到端工作流程外，研究人员还可以轻松调整第三方试剂，以快速实现与其他技术仍无法实现的其他高价值物种库的兼容性。扩大对广泛物种序列多样性的探索，使研究人员能够撒下更大的网，以增加发现用于开发新型疗法、诊断和试剂的完美抗体的机会。