仪器设备
试剂耗材
解决方案
test
一,转染攻略 — 4 种转染方法比较
细胞转染是指将外源分子如 DNA、RNA、蛋白质等导入到真核细胞的技术。随着基因和蛋白功能的深入研究,转染已经成为科研实验中最常用的技术手段之一。
细胞转染技术主要分为三大类:物理转染法、化学转染法及生物转染法
理想的细胞转染方法应具有转染效率高、细胞毒性小及重现性好等特点。目前常用的转染方法有阳离子聚合物转染、脂质体转染、电穿孔和病毒感染,不同的转染方法各有利弊,没有一种转染试剂是普遍适用的,我们需要依据自己的实验需求选择合适的转染技术及转染试剂,才有可能得到理想的实验结果。
二,转染攻略 — 5 个问题全面解答
1. 细胞状态
细胞状态不好,会导致转染效率低下,为确保良好的细胞状态需注意以下几点:
a. 转染实验前,细胞解冻后传代 3~4 次;
b. 使用活性 > 90% 的细胞,可通过台盼蓝染色等测定细胞活性;
c. 定期传代细胞,切勿让细胞长到汇合状态或过度生长,多数情况下,当细胞汇合度达到 60%~80% 时转染效率较高。
2.使用优质 DNA
为实现高效率、低毒性的转染,应使用高质量的 DNA(高纯度、无菌、无内毒素)。
a. 使用无内毒素的试剂盒和实验方案制备 DNA;
b. 测定 DNA 纯度,OD 260/280 值应介于 1.7~1.9 之间,越接近 1.8 越好;
c. 使用无 DNA/RNA 酶的水或 TE 稀释 DNA。
3.载体构建
若质粒基因产物对细胞有毒害作用,则转染难以成功。转染载体的构建选择可调控,强度合适的启动子很重要,可以以空载体或相同载体的其他基因为对照排除毒性对细胞的影响。
4.优化转染试剂/DNA 的比例
不同细胞系转染效率通常不同,需要进行预实验,选择合适浓度的 DNA,调整 DNA 与转染试剂的比例,以获得较高的转染效率。
5.防止污染
细胞污染也会造成转染效率低下,为防止细胞污染应注意:
a. 培养物污染
培养物可被细菌、真菌、病毒、支原体或其他细胞种类所污染,各种污染均会导致结果错误。
b. 支原体污染
支原体污染一般难以察觉,培养的细胞被支原体污染后,几乎可以改变细胞的所有功能,包括酶的作用途径,细胞膜的组成,染色体结构,以及转染效率。因此,必需进行支原体污染的常规筛查。
c. 交叉污染
三,转染攻略 — 2 个方法助力效率验证
转染完成后需要对转染效率进行验证,常用的转染效率验证方法有以下两种:
1、利用含 GFP 或 RFP 之类报告基因的质粒作为阳性对照,评估转染效率。
使用荧光显微镜或流式细胞仪可以测定转染细胞和 GFP 蛋白表达细胞的百分比。
a. 转染后 24~48 小时,即可以检测到质粒的表达。
b. 阳性对照可以放在一个单独的孔中,或是与目的质粒共转染。
2、利用 qPCR 法精确定量目的基因。
在蛋白工程和化学偶联技术的推动下,抗体偶联药物(Antibody-drug conjugates, ADC)和双特异性抗体成为了当下重要的大分子药物类型,推动肿瘤为代表的多个疾病领域的疗法...
虾夷扇贝 海洋美味的科学守护 虾夷扇贝为大型冷水性贝类,凭借闭壳肌大、生长快、经济价值高等特点,深受国内外市场的欢迎。而虾夷扇贝的繁育史,...
超低温冰箱是科研和临床应用中必备的基础设备,但是传统的超低温冰箱体积庞大,难以搬运,并且对电源有特殊要求,这就限制了超低温冰箱在临床环境中的使用。 ...
上海玮驰仪器有限公司(上海 · 苏州 · 南京 · 杭州)
上海市浦东新区环科路999弄浦东国际人才港13号楼2楼 | 400-820-3556
江苏省苏州市工业园区新平街388号21幢5层08单元 | 0512-65107980
江苏省南京市雨花台区软件大道109号雨花客厅3幢609室 | 025-83531339
杭州市钱塘新区2号大街519号佳宝科创中心1号楼1005室 | 0571-86630817
2019 © Shanghai Weichi Instrument Co., LTD. All Rights Reserved. Design by 沪ICP备18022436号-1
沪(浦)应急管危经许[2022]202300(Y)
网站技术支持:上海网站建设公司&上海SEO优化公司-派琪网络
投诉与建议