内毒素检测-重组C因子法的原理及操作步骤！

一，重组C因子法原理

PyroGene™重组因子C试剂盒是一种不含动物制品的LAL替代方案，FDA已许可将其作为一种替代方法。它基于一种重组产生的C因子(rFC)，C因子是马蹄蟹凝血级联反应中的第一个组成部分。 它由内毒素结合激活。然后，产生的活性成分发挥作用，裂解合成底物，释放荧光。反应在96孔板中操作，使用380/440nm的激发/发射波长，在时间零点和一小时孵育后，在荧光酶标仪中以37°C ± 1°C孵育的时间零点和一小时后，分别测量荧光。

比较细菌内毒素检测试剂盒中的扩增方法

对一小时读数和零时读数之间的差 (∆RFU)进行校正，用于阴性对照 ∆RFU荧光。净荧光的对数与内毒素浓度的对数成正比，并且在0.005-5.0 EU/ml范围内呈线性。样品中内毒素的计算与标准曲线有关。

三，重组C因子法检测所需主要设备、材料

试剂

– rFC酶溶液

– 荧光底物

– rFC定缓冲液

– 内毒素工作标准品 (CSE)

– LAL 试剂检查用水（即LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)

器具

– 玻璃稀释管(# N207)

– 独立包装的血清吸管（选购）

– 标签

– 96-微孔板 (# 25-340)

– 试剂槽(# 00190035)

请使用经内毒素试验验证合格的无热原器具。

设备和软件

– 八道移液器

– 孵育荧光酶标仪

– WinKQCL™软件

– 移液器

– 计时器

– 漩涡混合器

三，操作步骤

注意事项

– 使用匹配的试剂

– 使用玻璃管制作内毒素稀释液[不推荐使用塑料管]

– 遵循所有关于内毒素漩涡震荡次数的建议

– 使用经内毒素试验验证合格的无热原器具

– 使用前，先使试剂温度与室温保持相同

– 不要旋转工作试剂

– 将试剂放入96-微孔板的孔中时，避免产生气泡

– 不要污染样品、标准品、LRW 和器具

– 应正确安装、验证并维护设备仪器

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