内毒素检测（光度法）的原理及操作步骤！

时间：2023-11-21 来源：上海玮驰仪器有限公司阅读：912

一，动态显色法原理

革兰氏阴性细菌内毒素催化了LAL中酶原的活化。初始活化速率由内毒素的浓度决定。活化后的酶催化了无色底物 Ac-lle-Glu-Ala-Arg-pNA释放出pNA。在整个孵育过程中，用光度法连续测量405nm处的游离pNA。通过将其反应时间与标准曲线比较，计算出样品中的内毒素浓度。

酶原内毒素凝固酶

底物 + H2O 酶肽肽 + pNA

二，动态浊度法原理

浊度法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化来检测内毒素含量的鲎试验法。动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度或透光率所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。随着凝胶的形成，反应液吸光值的增加、OD值增加速率和内毒素的浓度呈正相关。

三，光度法检测所需主要设备、材料

试剂

– 鲎试剂（LAL）（Kinetic-QCL™ 或 PYROGENT™-5000 试剂）

– 内毒素工作标准品 (CSE)

– LAL溶解缓冲液（用于PYROGENT™-5000动态浊度法LAL 试验）

– LAL 试剂检查用水（即LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)

器具

– 玻璃稀释管(# N207)

– 独立包装的血清吸管（选购）

– 标签

– 96-微孔板 (# 25-340)

– 试剂槽(# 00190035)

请使用经内毒素试验验证合格的无热原器具。

设备和软件

– 八道移液器

– 光吸收酶标仪

– WinKQCL™软件

– 移液器

– 计时器

– 漩涡混合器

四，操作步骤

本指南分步描述了如何进行传统动态法鲎试剂（以下简称LAL）试验。试验开始前，先使试剂瓶温度与室温相同。还应打开孵育酶标仪，并在WinKQCL软件中创建微孔板模板。

五，注意事项

– 使用配套的LAL和 CSE 试剂

– 建议勿使用塑胶管稀释内毒素

– 遵循所有关于内毒素漩涡震荡次数的建议

– 使用经内毒素试验验证合格的无热原器具

– 使用前，先使试剂温度与室温保持相同

– 不要对LAL进行漩涡震荡

– 将试剂放入96-微孔板的孔中时，避免产生气泡

– 不要污染样品、标准品、LRW 和器具

– 应正确安装、验证并维护设备仪器

玮驰相关产品

设备、软件
品牌	货号	名称
Lonza	25-315S	Lonza内毒素专用检测酶标仪，包含显色法、浊度法
Lonza	25-611	符合FDA PART 11认证的软件WinKQCL, 也包含一个仪器许可证

动态显色法LAL试剂盒
品牌	货号	名称	规格	灵敏度(EU/ml)
Lonza	50-650U	Kinetic-QCL 动态显色法LAL试剂盒	192次测试，8×24 测试/瓶溶解物，2瓶内毒素 3×30 ml/瓶LAL试剂检查用水	0.005至50
Lonza	50-650NV	Kinetic-QCL™ 动态显色法LAL试剂盒	2,040次测试，85×24 测试/瓶溶解物，15瓶内毒素	0.005至50
Lonza	50-650H	Kinetic-QCL™ 动态显色法LAL试剂盒	2,400次测试，100×24 测试/瓶溶解物，10瓶内毒素	0.005至50
Lonza	K50-643L	Kinetic-QCL™ 动态显色法LAL试剂盒	600次测试，25×24 测试/瓶溶解物	0.005至50
Lonza	K50-643U	Kinetic-QCL™ 动态显色法LAL试剂盒	2400次测试，100×24 测试/瓶溶解物	0.005至50

动态浊度法LAL试剂盒
品牌	货号	名称	规格	灵敏度(EU/ml)
Lonza	N383	PYROGENT™-5000动态浊度LAL试剂盒	100次测试，2×50测试/瓶溶解物，2瓶重组缓冲液，1瓶内毒素	0.01至100
Lonza	N384	PYROGENT™-5000动态浊度LAL试剂盒	200次测试，2×100测试/瓶溶解物，2瓶重组缓冲液，1瓶内毒素	0.01至100
Lonza	N588	PYROGENT™-5000动态浊度LAL试剂盒	2,250次测试，45×50测试/瓶溶解物，45瓶重组缓冲液，10瓶内毒素	0.01至100
Lonza	N688	PYROGENT™-5000动态浊度LAL试剂盒	4,500次测试，45×100测试/瓶溶解物，45瓶重组缓冲液，10瓶内毒素	0.01至100

无热原吸头
品牌	货号	名称	规格
Lonza	BE25-415	Eppendorf® 2-200μl Biopur™ 移液管吸头	<0.001 EU/mL，5个托盘/pkg;96个吸头/托盘
Lonza	BE25-416	Eppendorf® 2-300μl Biopur™ 移液管吸头	<0.001 EU/mL，多通道移液器，5个托盘/pkg;96个吸头/托盘
Lonza	BE25-417	Eppendorf® 50-1000μl Biopur™ 移液管吸头	<0.001 EU/mL，5个托盘/pkg;96个吸头/托盘

LAL试剂检查用水
品牌	货号	名称	规格
Lonza	W50-640	LAL试剂检查用水	<0.005 EU/mL,30 ml/瓶
Lonza	W50-100	LAL试剂检查用水	<0.005 EU/mL,100 ml/瓶
Lonza	W50-500	LAL试剂检查用水	<0.005 EU/mL,500 ml/瓶
Lonza	W50-1000	LAL试剂检查用水	<0.005 EU/mL,1000 ml/瓶

无热原96孔板
品牌	货号	名称	规格
Lonza	25-340	无热原96孔板	内毒素测试<0.0005EU/孔，50/箱

无热原试管
品牌	货号	名称	规格
Lonza	N207	无热原试管	30/铝箔包
Lonza	N201	无热原试管	50/箱
Lonza	N205	无热原试管	50/铝箔包

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