Lonza 4d-Nucleofector 96shuttle/384-well转染应用分享！

一，正序—体外基因编辑疗法

电穿孔方法进行T细胞基因编辑的瓶颈：电穿孔技术在以往研究中发现，当加入长的双链DNA以及浓度非常高的情况下，会对细胞造成很高的毒性引发细胞死亡，短的单链DNA就不会。

Theo及其团队选择Lonza 96 shuttle高通量电穿孔系统对CRISPR与DNA的比例、细胞培养的不同方式、不同强度的电脉冲等参数进行摸索优化，很好的解决了双链DNA对细胞毒性大的问题。Theo等从健康人体内获得T细胞，利用Lonza Nucleofector技术更换了T细胞的TCR，使这些细胞能够特异性地攻击人黑色素瘤细胞。

二，新药开发—全基因组阵列CRISPR-Cas9筛选

2019年，GSK（英国葛兰素史克公司GlaxoSmithKline）公司与加州大学创建了基因组研究实验室（LGR）。

SLAS2020国际会议与展览在T细胞中进行阵列CRISPR-Cas9基因编辑筛选的384孔工作流程。

基于这一用于T细胞筛选的小型、稳健的高通量电转染方案和分析，GSK成功解决了原代T细胞的转染难题，并展示了全基因组阵列CRISPR-Cas9筛选在原代细胞转染中的潜力。

三，新冠研究—高通量CRISPR筛选

加州大学旧金山分校的研究团队使用Lonza 384-well Nucleofector™ 来进行阵列CRISPR筛选，以识别增强或抑制新冠病毒感染的宿主蛋白。

Comparative host-coronavirus protein interaction networks reveal pan-viral disease mechanisms[J]. Science (New York, N.Y.), 370(6521):eabe9403.

四，新冠研究—高通量CRISPR筛选

巴斯德研究所的研究团队同样应用到了Lonza 384-well Nucleofector™ 系统进行高通量的CRISPR/Cas9筛选，评估了1905个ISG（IFN stimulated genes）在人肺上皮细胞中调节SARS-Cov-2复制的能力。

Mac Kain, A., Maarifi, G., Aicher, S. et al. 2021. Identification of DAXX As A Restriction Factor Of SARS-CoV-2 Through A CRISPR/Cas9 Screen.

五，siRNA筛选靶点——开发脑瘤候选药物

丹麦癌症协会研究中心的研究人员基于Lonza 384-well Nucleofector™ 系统进行了高通量siRNA文库筛选，采用的siRNA库包含296个基因靶点，阳性对照（INCENP9）和阴性对照(siRNA的加扰对照)，每个基因设计了3个独立的 siRNA。基于此，研究人员发现了胶质母细胞瘤的潜在靶点——SPT6，并证实了SPT6丢失诱导的DNA双链断裂（DSB）是胶质母细胞瘤特异性的。

Obara E , Aguilar-Morante D , Rasmussen R D , et al. SPT6-driven error-free DNA repair safeguards genomic stability of glioblastoma cancer stem-like cells[J]. Nature Communications, 2020, 11(1):4709.

六，原代细胞转染——特发性肺纤维化治疗

阿斯利康采用Lonza原代细胞，IPF肺成纤维细胞，探索了IPF(特发性肺纤维化Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)的关键疾病驱动机制。在这项研究中，Lonza 384-well Nucleofector™ 系统成功对原代健康人类肺成纤维细胞的第2代细胞进行了CRISPR-Cas9 RNP转染递送。研究结果证明了PPP1R15A在调节肺间充质细胞中的主要作用，并且提示了特发性肺纤维化的一种新治疗策略。

Monkley S , Overed-Sayer C , Parfrey H , et al. Sensitization of the UPR by Loss of PPP1R15A Promotes Fibrosis and Senescence in IPF[J]. Scientific Reports.

七，多质粒的高通量电穿孔，优化CRISPR碱基编辑

上海交通大学童垚俊教授团队开发了一种基于CRISPR-Prime编辑技术的通用（无双链断裂）原核生物遗传操作工具箱，通过Lonza 384-well Nucleofector™ 系统进行高通量的多质粒电穿孔，实现了大肠杆菌的质粒和染色体的基因敲除、敲入、敲低、单碱基替换和组合编辑。

Tong, Y., Jørgensen, T.S., Whitford, C.M. et al. A versatile genetic engineering toolkit for E. coli based on CRISPR-prime editing. Nat Commun 12, 5206 (2021)

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