电转百科指南之每日问候：您的细胞转染结果好吗？

如果转染结果不好，建议检测您的细胞是否有支原体污染。

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支原体污染细胞培养物会以多种方式影响您的细胞，其中大多数会降低实验结果的可靠性、可重复性和一致性。在真核细胞中观察到的一些影响可能包括：

由于营养匮乏而导致蛋白质、RNA 和 DNA 合成水平的改变

细胞形态的变化

细胞因子释放增加（或减少）

支原体污染影响转染效率

有数据表明[1]，由于支原体污染对真核细胞的各种影响，与未污染的细胞相比，支原体污染的细胞转染后具有较低的基因表达水平。

转染效率降低很可能是支原体对其宿主细胞产生多种影响的结果，例如它们驻留在细胞膜中，从而调节细胞膜过程或争夺营养物质。Yin等人最近证明[2]，支原体污染使细胞转染效率降低的部分原因是必需氨基酸 L-精氨酸的缺乏。这种 L-精氨酸缺乏是由微生物酶精氨酸脱亚胺酶 (ADI) 引起的，这种酶在支原体中含量丰富，它们负责支原体对 L-精氨酸的分解代谢。

下图显示了转染GFP表达载体的Hela细胞，当细胞感染支原体（M. Fermantans）时，GFP表达水平显著降低。

MycoAlert™ 支原体检测试剂盒为您的转染效率提供支持

为确保您的细胞没有支原体，建议每两周定期进行一次支原体检测。除了日常的监测外，我们强烈建议您在转染实验开始前检测支原体，使用没有支原体污染的细胞进行后续的实验，从而进一步提升细胞转染的效率和活率，减少实验重复带来的负面影响，为您的转染实验开一个好头。

MycoAlert™ 支原体检测试剂盒易于使用且易于集成到碎片化时间中。该检测通过简单的两个步骤，通常可在 20 分钟内获得结果。作为一种选择性生化检测，其原理为测定支原体酶的活性。这些支原体酶广泛存在于六种主要支原体细胞培养污染物和绝大多数 180 种支原体物种中，但不存在于真核细胞中。

裂解测试样品（细胞上清液）中的活支原体，支原体酶与MycoAlert™ 底物反应，催化 ADP 转化为 ATP。然后，ATP 通过 MycoAlert™ 试剂中的荧光素酶转化为光信号。通过在添加 MycoAlert™ 底物之前（读数 A）和添加 MycoAlert™ 底物之后（读数 B）测量样品中 ATP 的水平，可以获得指示支原体存在与否的比率。

除此之外，牢记以下十大守则，远离支原体污染！