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Lonza 4D-Nucleofector电转百科指南:如何提高电转染效率?

时间:2023-06-13 来源:上海玮驰仪器有限公司 阅读:379

以下文章来源于Lonza Bioscience ,作者Lonza Bioscience

 

在之前的“电转知识”文章中,我们已经了解了转染技术的起源与发展,包括各类转染方式的优缺点

 

 

以及在电转方法中,Lonza 4D Nucleofector™平台所能提供的设备型号:

 

 

Nucleofection™ 核转--5步简单的操作方案,实现轻松电转

 

 

那么选择电转方法后,该如何提高电转染效率呢?Lonza电转技术专家为大家总结了以下八点:

 
 

1    准备好加了新鲜培养基的多孔板,并在实验前于37°C下预平衡

2    使用传代次数少并具有推荐融合度或密度(对数生长期)的细胞

3    针对于贴壁细胞,需限制胰蛋白酶暴露时间,仔细监测细胞分离情况

4    根据优化方案进行细胞计数并使用适量细胞数;所用细胞过少可能导致细胞死亡率增加,所用细胞过多可能导致细胞电转效率降低

5    采用高质量DNA,使用内毒素去除试剂盒进行纯化;请通过测定A260:A280比值检查各质粒制备液的纯度

6    室温下以离心速度80-100×g和方案规定的时间进行离心

7    离心后加入Nucleofector™溶液,混匀溶液/细胞沉淀制备成单细胞悬液,避免对细胞沉淀进行额外操作或用移液器枪头重复抽吸

8    Nucleofection™核转后,用核转试剂盒内配的一次性移液管在电转耗材中的细胞顶部加入约500μL预热培养基

       轻轻将一次性移液管吸头置于电转耗材底部,收集细胞

       将细胞悬液轻轻接种至制备的多孔板中

       请勿重复吹吸混合细胞

 

 

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