你知道有多少种方法可以检测细胞因子吗（下）

细胞因子检测方法

单因子检测多因子检测

细胞因子是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。其作用是通过结合相应受体调节细胞生长、分化和效应，调控免疫应答。细胞因子，是细胞分化和行使功能时的产物，相当于人体内各类细胞间相互交的“信使”。它们被广泛地应用于医学诊断、抗癌治疗、免疫调节、以及自身免疫等多种领域。

多因子检测方法

CBA 多因子检测技术

CBA（Cytometric Bead Array，流式细胞术微球阵列）方法是一种多因子检测技术。

CBA检测原理

将不同荧光强度的微球包被上针对不同分析物（如细胞因子、趋化因子等）的特异性抗体。当与样本孵育时，样本中的待测分析物与微球上的抗体结合。然后加入荧光标记的检测抗体，形成 “三明治” 复合物。通过流式细胞仪检测微球的荧光强度和标记检测抗体的荧光信号，根据已知标准品的浓度建立标准曲线，从而确定样本中各种分析物的浓度。

CBA检测特点

• 高通量，可以同时检测多种分析物，通常一次可检测几十种甚至上百种生物标志物。
• 高灵敏度，能够检测到低浓度的分析物，检测限可达到 pg/mL 级别。
• 特异性强，由于采用了特异性抗体，对目标分析物的识别具有高度的特异性。
• 样本需求量少，一般只需要少量的样本体积，适用于珍贵样本或样本量有限的情况。

CBA检测的局限性

样本处理复杂

样本在进行 CBA 检测前通常需要进行复杂的处理。如果样本中存在细胞碎片、血小板聚集物等杂质，可能会干扰微球与细胞因子的结合反应，进而影响检测结果。

检测范围有限

CBA 技术有一定的检测范围。尽管它能够同时检测多种细胞因子，但对于某些极高或极低浓度的细胞因子，可能无法准确检测。在检测高浓度细胞因子时，可能会出现信号饱和的情况。

校准和标准化困难

CBA 检测的校准和标准化相对复杂。不同批次的微球、抗体以及检测试剂可能会存在差异，这就需要进行严格的校准和标准化操作。

ECL电化学发光多因子检测

电化学发光（ECL）技术是一种高灵敏度、高通量、多靶点的免疫分析技术。它通过使用SULFO-TAG标记物，在微孔板的电极表面通电后，电化学作用激发SULFO-TAG标记物发出强光，从而实现对生物分子的定量分析。当施加一定的电压时，标记物发生电化学发光反应，产生光信号，仪器通过检测光信号的强度来定量分析目标因子的含量。

单细胞分泌多因子检测

在生理和病理过程中，细胞间通讯主要通过分泌细胞因子来实现。传统的检测方法往往是对细胞群体进行分析，得到的是细胞群体的平均分泌水平，这可能会掩盖单个细胞之间的异质性。而单细胞分泌多因子检测能够精准地揭示单个细胞的功能状态，对于理解细胞分化、免疫反应、肿瘤微环境等复杂生物学过程至关重要。

IsoPlexis单细胞维度的多因子检测平台

技术原理

单细胞捕获：运用微流控技术，凭借 12,000 个独立的亚纳升级别的微室，能够同时捕获上千个单细胞，从而实现对单个细胞的精准操控与分析，极大地提高了检测的通量以及单细胞分辨率。

蛋白质捕获：结合 IsoCode 芯片抗体条形码技术，在每个微室中可以捕获单个活细胞分泌的多种蛋白质，或者对单细胞裂解后释放的多种磷酸化蛋白进行捕获， 一次能够采集多达 30 种以上的功能蛋白质。

蛋白检测：基于 ELISA 原理的全自动化蛋白检测技术，对捕获到的多重蛋白的荧光信号进行检测，以此实现对单细胞蛋白质组的高灵敏度检测，通过检测荧光信号的强度来定量分析蛋白质的含量。

技术特点：

高灵敏度与高通量：可在单细胞水平检测活细胞分泌的细胞因子及胞内功能蛋白，既能检测到低丰度的蛋白质，又能一次性检测大量单细胞，为深入研究细胞功能和疾病机制提供了丰富的数据。

全自动平台：集单细胞捕获、孵育、多重蛋白检测及分析于一体，减少了人为因素的干扰，不仅提高了实验结果的准确性和可重复性，还大大缩短了实验周期，提升了研究效率。

节约成本：加速研究及治疗开发周期，助力筛选最有前途的产品，从而节约成本，提高研发效率，在药物研发和临床研究中具有重要的应用价值。

ELISPOT 即酶联免疫斑点检测

ELISPOT 即酶联免疫斑点检测，是一种基于抗原 - 抗体特异性反应的免疫学检测技术。将捕获抗体包被在 PVDF 微孔板的膜上，加入细胞进行培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子会被膜上的捕获抗体结合，移除细胞后，被捕获的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识，其后再与酶标记的亲和素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的染色斑点，每个斑点代表一个分泌细胞因子的细胞。

ELISPOT可直接检测单个细胞分泌细胞因子的情况，而非细胞群体的平均分泌，能够精准地揭示单个细胞的功能状态，有助于发现细胞间的异质性。

但ELISPOT对操作要求严格，细胞的接种密度、孵育时间、试剂的质量和浓度等因素都会影响检测结果，需要严格控制实验条件，以确保实验的准确性和重复性。

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