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中医药作为我国五千年传承的宝贵财富,其疗效与科学性历经岁月洗礼,得到了广泛认可。然而,由于中医药的理论体系及其作用机制仍有许多尚未明晰之处,这在一定程度上制约了其深入发展和广泛应用。
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转录组是指特定细胞在特定功能状态下所表达的全部基因的总和,通过对其进行深入研究,可以揭示不同组织或不同生理状态下基因表达水平的差异。人体疾病的调控机制与转录组中的差异基因以及信号通路的变化紧密相关,这为深入探索生命科学的奥秘提供了重要线索。
通过对中药药物干扰后的细胞系进行比较转录组研究分析,我们可以从整体上把握药物处理对细胞活动的影响。通过分析功能基因及其表达规律,我们可以确定与特定表型相关的信号通路和关键基因,从而精准锁定药物作用的靶点。同时,这种研究方法还有助于筛选出具有潜力的药用成分,为新型中药药物的研发提供科学、精确、全面的数据支撑。
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因此,采用转录组测序(RNA-seq)技术深入探究中医药的研究领域,不仅有助于我们更全面地理解中医药的作用机制,而且有望为新型药物的研发开辟一条崭新的道路,从而推动中医药事业的稳步发展。
传统的RNA-seq文库构建方式通常是每个样本单独进行,这种方式不仅建库通量较低,还导致建库成本高昂。为了克服这一难题,研究者们成功开发了一种高通量、低成本的中药转录组混样测序技术,即TCM-seq技术[1]。该技术在建库环节巧妙地将多个样本混合在一起进行建库,尤其适用于中药这种成分复杂且需要大量样本的实验,为中医药研究提供了更为高效和经济的方法(图1)。
生物公司也成功开发出商业化的建库试剂盒,此试剂盒可高效地完成对数百种药物处理后的细胞进行RNA捕获和混合建库流程,进而支持高通量药物筛选工作的高效推进。同时,该试剂盒也适用于在多种不同细胞系及不同处理条件下,对同一类中药处理样本进行RNA捕获和混合建库,为中药药效机制的研究提供有力支持。这种建库方法通常结合了样本条形码技术和一步法反转录扩增技术,能够高效地获取细胞培养板中的cDNA分子,随后进行混合建库。在测序完成后,通过识别不同的条形码信息,可以精确地拆分出各个样本的转录组信息,从而确保研究结果的准确性和可靠性。
该技术一般分成以下3步:
具体的建库流程:
在上面建库流程中,瑞孚迪JANUS G3工作站整合NIVO酶标仪(用于浓度检测)和Labchip微流控毛细管电泳(用于片段检测)可以帮助客户实现整体建库流程的自动化(如下图)。
Janus G3整合型移液工作站:
灵活配置,配合ODTC模块、磁力架模块、倾斜模块可实现RNA-seq文库制备工作。
独立4或8通道, 各通道均有液面探测功能,并可转移不同体积液体
移液通道间距可自动调整,可操作不同规格的容器
可进行浓度均一化,系列稀释和PCR板准备
可整合labchip及酶标仪,提供自动化方案
LabChip®GX Touch核酸分析仪
质控金标准,基于微流控技术
速度快,大约30秒内即可对核酸进行质量控制分析
自动化程度高、运行成本低、通量高且灵活等特点
DNA/RNA样本以及下游NGS文库片段质控
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