Lonza 4D电转八大技巧直观攻克细胞转染率难题

时间：2024-12-11 来源：上海玮驰仪器有限公司阅读：9

在之前的“转染方法如何选”中，物、化、生三大类转染方法的优缺点已进行总结归纳，下面是复习时间：

电穿孔，即我们常说的“电转”，是实验室中除了病毒转染、脂质体或PEI转染外使用较为普遍的一种物理转染方法。

对于电转方法的使用，有人说它们能够高效转染难以转染的细胞如神经元、免疫、原代细胞等，同时在现阶段大热的应用中，如基因编辑、CRISPR筛选，甚至于近年来新型崛起的合成生物学和AI制药研发中，都常能看到电转技术的应用。

而作为获得今年生物技术领域全球第四大的私募融资的实体瘤CAR-T明星公司Arsenal Biosciences，也是采用了非病毒载体的基因编辑CITE技术(CRISPR Integration of Transgenes by Electroporation)，即用电穿孔手段实现T细胞的转基因CRISPR整合技术，使T细胞有选择性地靶向肿瘤，从而使患者的免疫系统能够在不破坏正常组织的情况下摧毁ccRCC细胞(clear-cell renal cell carcinoma)。

那么如何在实验中提高电转效率，想必是大家最关心的问题，那这八大注意事项一定能够帮到你：

1准备好加了新鲜培养基的多孔板，并在实验前于37°C下预平衡

2使用传代次数少并具有推荐融合度或密度（对数生长期）的细胞

3针对于贴壁细胞，需限制胰蛋白酶暴露时间，仔细监测细胞分离情况

4根据优化方案进行细胞计数并使用适量细胞数；所用细胞过少可能导致细胞死亡率增加，所用细胞过多可能导致细胞电转效率降低

5采用高质量DNA，使用内毒素去除试剂盒进行纯化；请通过测定A260:A280比值检查各质粒制备液的纯度

6室温下以离心速度80-100×g和方案规定的时间进行离心

7离心后加入Nucleofector™溶液，混匀溶液/细胞沉淀制备成单细胞悬液，避免对细胞沉淀进行额外操作或用移液器枪头重复抽吸

8Nucleofection™核转后，用核转试剂盒内配的一次性移液管在电转耗材中的细胞顶部加入约500μL预热培养基

轻轻将一次性移液管吸头置于电转耗材底部，收集细胞

将细胞悬液轻轻接种至制备的多孔板中

请勿重复吹吸混合细胞

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