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在抗体药研发过程中,经常需要对样本中的抗体含量进行高通量检测。目前较为传统的检测方法是ELISA法,但是其存在耗时长、通量低等问题,且对于一些珍贵的样本来说,ELISA法样本消耗量大,无法满足低样本量检测的需求。那么,如何从ELISA法无缝切换到其他高通量的检测方法呢?瑞孚迪有大招!
无缝切换之方法学
瑞孚迪HTRF&Alpha均相检测技术,也叫“免洗ELISA”技术,它的反应原理和ELISA类似,但是省去了ELISA繁杂的包被洗板的过程,整个实验过程仅需“加样-孵育-检测”,2h即可完成整个实验,且反应体系仅需20 ul,特别适合一些比较珍贵的样本。
瑞孚迪提供IgG及其亚型、Fc、VHH、轻链等一系列检测试剂,帮您准确、快速地测定细胞上清及血清样本中的抗体含量,适用于抗体药物研发不同阶段的高通量检测需求。
无缝切换之酶标仪
瑞孚迪HTRF&Alpha抗体定量检测试剂盒,仅需带有时间分辨荧光(TRF)模块或者Alpha模块的酶标仪即可完成检测,无购买大型设备之困扰 (文末有相关酶标仪推荐)。
产品介绍
瑞孚迪HTRF Human IgG Detection Kit
本试剂盒采用双抗夹心法,可对细胞上清和血清样本中人的IgG进行定量检测 (线性范围:0.9- 2,000 ng/mL)。试剂盒含有一对抗体对,分别识别人Fc区域 (Eu标记,Anti-hFc-Eu) 和Fab区域 (D2标记,Anti-Fab-D2),当待检样本中含有人IgG时,Anti-hFc-Eu和Anti-Fab-D2会同时结合到IgG上,发生荧光共振能量转移 (FRET),待测样本中的人IgG浓度与FRET信号值成正比 (如图1所示)。
图1. HTRF Human IgG Detection Kit检测原理图
操作流程
分别加入待检样本/标准品以及Eu和D2标记的抗体对后,室温孵育2 h,即可使用酶标仪进行读值检测 (如图2所示)。
图2. HTRF human IgG Detection Kit检测流程
应用案例
利用HTRF方法筛选高产量稳定细胞株
发明专利申请:无锡药明康德生物技术有限公司
申请号:201210073641.0
本发明公开了利用HTRF筛选高产量稳定细胞株的方法,耗时短,通量高,操作简单,结果稳定,可以在短时间内有效的筛选出高表达的细胞株克隆,加快了生物制药行业的进程。本发明专利中使用的Human-IGg-XL665 和 Anti-Human-IGg-Fc-Cryptate,使用的是Cisbio公司 (现已更名为Revvity,瑞孚迪) 的试剂盒。
利用AlphaLISA检测血清中抗体含量
猪流行性腹泻(PED)被认为是由肠道致病性 α 冠状病毒猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种再发猪病。在缺乏有效疫苗的情况下,通过诊断检测和检疫进行感染预防和控制至关重要。猪流行性腹泻病毒感染的早期检测和鉴别诊断增加了成功控制该疾病的机会。因此,持续需要开发减少检测步骤的方案、免洗的高通量免疫测定方法。本研究描述了在实验和现场条件下,使用一种快速、灵敏的均相测定法。
研究结论:AlphaLISA以新的速度、灵敏度和使用简便性实现了对病原体特异性抗体的检测和表征。特别是,桥接测定法构成了一种快速诊断方法,大大改善了现有免疫测定的“出结果时间”指标。
引用文献:Kay Kimpston-Burkgren et al. Characterization of the Humoral Immune Response to Porcine Epidemic Diarrhea Virus Infection under Experimental and Field Conditions Using an AlphaLISA Platform. Pathogens 2020, 9(3), 233; https://doi.org/10.3390/pathogens9030233
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