单细胞功能蛋白组学用于工艺流程优化研究方案——助力Iovance TIL 工艺优化

细胞治疗工艺流程优化案例

IsoPlexis 单细胞功能蛋白质组技术将单细胞技术和功能性蛋白质组学结合起来采用独特的微流控微室反应和抗体条码专利技术在单细胞水平对分泌的多种细胞因子和胞内磷酸化蛋白组等在活细胞状态下进行高灵敏多重检测分析，对功能蛋白进行定性、定量，以此洞察单细胞功能异质性。

通过简单易用的生信分析软件对单细胞数据进行自动分析，得到具有指导性的结果，帮助下一步决策。

IsoPlexis助力Iovance TIL 工艺优化

发表成果：Iovance Generation-2 Tumor-infiltrating lymphocyte product is reinvigorated during the manufacturing process, ESMO virtual conference, 2020

研究目的：过继细胞疗法是一种可以逆转内源性 TIL 功能障碍的治疗策略，其过程涉及将 T 细胞从免疫抑制性 TME 中迁移出来， 在体外显着扩增 TIL，同时使其恢复活力，并将细胞重新注入患者体内。为了确定使用 Iovance 的第 2 代扩增方案 （D22 TIL） 生成的 TIL 是否导致 TIL 群体重新焕活，相对于内源性 TIL （D0），评估了 D0 和 D22 TIL 的表型、功能和肿瘤反应性。

实验设计：使用 FACS 对从消化的肿瘤活检中分离的内源性 CD3+ TIL （D0） 进行分选，并与使用 Iovance 的 Gen 2 工艺 （D22） 扩增 22 天的 TIL 进行比较。来自黑色素瘤、宫颈癌和头颈部鳞状细胞癌的 7 对 D0 和 D22 TIL 的 T 细胞亚群通过 FACS 评估表型和调节标志物，通过体外激活评估功能，通过自体肿瘤共培养评估肿瘤反应性。

实验结果：在经过IOVANCE第二代TIL扩增培养22天后，TIL中CD4和CD8的多功能性和PSI指数显著升高。说明Iovance 的第二 代（Gen2）TIL 扩增方案从多功能细胞角度能够与T细胞有效激活。结论：IsoCode单细胞分泌蛋白组芯片提供对于TIL细胞治疗产品工艺变更后的有效评估。

评估生产中搅拌式培养对于T细胞功能影响

发表文章：Enabling Allogeneic T Cell-Based Therapies: Scalable Stirred-Tank Bioreactor Mediated Manufacturing, Front. Med. Technol. ( 2020, IF=9.927)

研究目的：细胞疗法的临床需求要求 T 细胞活化和扩增技术具备有效性和可放大性。然而，新技术的联合使用可能会对治疗效 果产生意想不到的影响。

实验设计：在这项研究中Lonza 通过比较搅拌式培养前后的细胞，研究了搅拌式生物反应器对细胞多功能性的影响。

实验结果：结果显示，经搅拌式培养 14 天后，同时分泌 7 种或更多细胞因子的 CD4 和 CD8 细胞显著增加，其中许多细胞分 泌了效应、刺激性、趋化、调节性和炎症等功能的细胞因子组合。

结论：在决定是否采用新的制造和生物工艺技术时，这些详细的功能信息可以帮助验证细胞功能。