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双抗相比于单抗,双抗的表达过程会存在很多副产物,如半抗体、3/4抗体、同源二聚体、轻链缺失、单臂缺失及聚集体等,这些副产物的存在会严重干扰双抗的有效性以及安全性。
药明康德发表了pH-盐双梯度洗脱法在MMC ImpRes混合模式层析纯化基于WuXiBody双特异性抗体的应用,该论文使用LabChip GXII Touch HT仪器用于非还原CE-SDS分析。
WuXiBody是由药明康德开发的新型双特异性抗体(bsAb)。它的关键特征是用T细胞受体(TCR)恒定域取代了一个亲本mAb的CH1 / CL恒定区,该设计旨在促进同源重链(HC)-轻链(LC)配对。
下面我们一起来看看 LabChip 在双抗纯化检测中发挥了什么作用呢?
检测流程
LabChip GXII Touch HT用于非还原CE-SDS分析,所用芯片是Express。
蛋白质样品、标准、空白和Ladder在70℃加热10 min,然后上机LabChip GXII Touch HT 进行分析(每个run用2 μg样品)。
结果展示
Protein A洗脱液,经LabChip分析非还原CE-SDS。半抗体占16.7%,单臂缺失占1.8%,轻链缺失占8.5%。
MMC ImpRes洗脱液的纯度达到98.1%,与Protein A洗脱液,副产物A、B和C的百分比分别从16.7%、1.8%和8.5%下降到0.3%、0.6%和0.4%。
如下表所示,非还原的CE-SDS和SEC-HPLC分析进一步表明,MMC ImpRes洗脱液的纯度分别为98.1%和98.8%。
总结
在这项工作中,作者证明了在pH-盐双梯度洗脱下进行的MMC混合层析比在pH/盐单洗脱下提供了更高的分辨率梯度洗脱,有效地去除单梯度洗脱不能去除的副产物,LabChip GXII Touch HT助力非还原CE-SDS分析。
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