应用数据分享 | 解析Lonza 96孔电转模块两大应用案例

2023年Lonza Neclefector™技术面世22周年，成功应用于原代细胞、干细胞、神经元等难以转染的细胞中，文献引用量超过23,000+篇，成为基因治疗、细胞治疗、免疫治疗研究中的一大助力。

随着技术和产业的进一步发展，高通量核转染的需求越来越高。Lonza推出的4D-Nucleofector™ 96孔模块，每块板最多可运行96个独立程序，非常适合于中高通量的电转实验，具有快速、通量高、编辑效率优秀等特点，可广泛应用于阵列cDNA、工业生产元件、RNAi以及CRISPR文库筛选中，是优化电转条件、药物靶点发现以及疫病研究的高效工具。

应用案例分享

#1

文献名称：A platform for context-specific genetic engineering of recombinant protein production by CHO cells

应用方向：提高工业生产效率

发表期刊：Journal Of Biotechnology

发表时间：2020

研究内容：在蛋白质生产中，为了提高细胞系生产效率，往往需要针对目的蛋白（Target Protein）寻找到最合适的表达载体和培养条件。因此筛选表达载体过程中需要高通量方法（HT）高效的表达不同载体并测试其细胞性能（蛋白质生产效率及细胞生长能力），作者利用Lonza 96-well Shuttle™产品，在蛋白生产细胞系CHO中实现表达载体的高效筛选。

作者报道的实际测试数据：

A. Lonza 96-well Shuttle™产品转染效率（Transfection Efficiency）平均高达90%，且针对不同遗传载体转染效率差异较小

C. Lonza 96-well Shuttle™产品在随着加大电转质粒DNA量(Mass of mAB Expressing Plasmid DNA)加大对细胞活力(Growth Rate)影响较小

D. Lonza 96-well Shuttle™产品在不同批次(Replicates)电转中，批间差异小(Coefficient of Variation)

#2

文献名称：Validation of efficient high-throughput plasmid and siRNA transfection of human monocyte-derived dendritic cells without cell maturation

应用方向：针对免疫细胞进行DNA高效转染及RNAi筛选

发表期刊：J Immunol Methods

发表时间：2010

研究内容：针对原代免疫细胞转染，传统电转往往效率低下并且会导致原代免疫细胞活化及成熟，为后续原代免疫细胞研究以及工业生产造成影响。本文中，作者利用Lonza 96-well Shuttle™产品，构建针对原代树突状细胞（Primary Dendritic cells）高效转染的平台，针对难以转染原代树突状细胞实现70%细胞活率及超50%的转染效率。并利用该高效转染平台在原代树突状细胞中敲低RIG-I实现干扰素beta的下调表达。

作者报道的实际测试数据：

作者使用Lonza特异性转染缓冲液在单核树突状细胞（MoDCs）测试不同程序下（Nucleoporation Program，X轴）转染GFP的效率。可见利用Lonza 96-well Shuttle™高通量系统筛选出FF137/FF168具有接近60%的转染效率，并且保持90%以上的未成熟单核树突状细胞状态。

作者随后测试了FF168程序在单核树突状细胞中siRNA转染效率，RIG-I蛋白表达量在核转染后显著下调。

在全新升级的Lonza 4D-Nucleofector™ 96孔电转模块中，可直接与4D-Nucleofector™ 核心模块连接使用，用于96孔格式的中通量核转染。每块板最多可运行96个独立程序，非常适合于优化核转染条件或作为中高通量筛选的有效工具。

应用

• 只需一块板即可优化任何难以转染的细胞
• 测试建立实验的多个条件
• 筛选cDNA, RNAi或CRISPR、TCR文库
• 适用于细菌转化

优点

• 高效助力优化、筛选

每块板最多可运行96个独立程序，在5分钟内自动处理

• 可拓展性

模块化6×16 Nucleocuvette™板实现可拓展的通量

• 电转条件可转化性

可在不同4D-Nucleofector™模块中，使用相同优化好的电转条件，实现不同细胞量/通量的实验需求

• 自动化兼容

无缝集成到自动化液体处理环境中

优化方案

4D-Nucleofector™ 96孔模块可使用现有的96-well 电转实验方案或参考X-unit 20uL体系电转实验方案和导电聚合物96孔Nucleocuvette™板。

Lonza Knowledge Center中的Cell & Transfection Database中提供了特定细胞类型的优化方案或建议。在这些优化方案中，指出了经过内部测试的核转染条件。此外，还会分享我们在处理特定细胞类型方面的经验和知识，有效助力您的实验。