Cocoon® Magsep 磁分选工艺使用指南与客户案例分享

Lonza Cocoon® Platform 作为高灵活性，全封闭全自动化细胞治疗生产平台，目前已经在全球范围内布局130台，并有两个项目进入临床II期，助力细胞治疗产业化快速发展。

目前Cocoon® Platform已经推出Cocoon® Platform 2.0并整合了磁分选模块，进一步加强了Cocoon®的全自动化流程。今天Lonza将为大家详细介绍Cocoon®二代Magsep 磁选Protocol的使用指南。

01

安装调试

· 房间需求：EU GMP Grade B/C，19℃-22℃

· 场地环境：高度约1.5米操作台，长0.8米，宽1.2米，承重60kg，台面光滑水平（Cocoon®需进行水平校准）

· 电力需求：100-240 VAC，50/60Hz，6 Amp（UPS电源最佳）

· 气体准备：CO2，终端管路CPC 5/32" I.D. x 1/4" O.D.

· 网络接入

02

试剂耗材

03

工艺流程以及要点

Day0 细胞分选激活

包含步骤：

· Cocoon®外：PBMC分离，磁珠孵育

· Cocoon®内：培养基添加，细胞分选，细胞激活培养

初始进入细胞请使用纯净的已进行磁珠孵育的PBMC，如使用手动人工分离的PBMC，可于培养瓶中培养24h去除贴壁杂志细胞后方可进入Cocoon®培养。

请按照磁珠供应商推荐的工艺进行磁珠孵育，强烈推荐磁珠细胞比例为1:1，过多的磁珠会导致细胞的过度激活以及后期磁珠残留的增加。

Day1 细胞转导

包含步骤：pH校准；病毒转导

Cocoon®可以根据pH来自动调整舱体内CO2的浓度，同时可以根据培养体系内的溶解氧和pH来自动调整灌流速率来满足不同客户的需求。

Day2 病毒去除

包含步骤：病毒去除

培养室全换液以进行病毒去除。

Day3-8 细胞培养

包含步骤：细胞培养；磁珠去除

分别于Day4，Day7进行第一次以及第二次磁珠去除，强烈建议于Day4进行第一次磁珠去除，过度的细胞激活会影响T细胞的亚群以及影响T细胞在Cocoon®培养室中的增殖。

Day9 细胞收获

包含步骤：

· Cocoon®内：磁珠去除，细胞收获

· Cocoon®外：细胞洗涤，细胞冻存

于Day9进行细胞收获，进行第三次磁珠去除并进行洗涤收获。

Cocoon®可以进行洗涤，但是Cocoon®本身耗材不耐受DMSO，因此如需要在Cocoon®内进行细胞洗涤分装，请使用不含有DMSO的冻存液。

04

应用案例

目前已有中国广州以及新西兰客户使用Cocoon®进行了TLR2 CAR T cells的临床研究。

CAR结构如下：

与手工生产数据相比，Cocoon®在病人和健康人间展现了更稳定的阳性率：

同时，相较于手工工艺Cocoon®展现了更加稳定的细胞产量和纯度：

最后相较手工工艺也展现了类似的CD4/8细胞亚群：

一代Cocoon®与二代Cocoon®在细胞扩增以及细胞活率方面没有明显差距：

Cocoon® Platform具有高度灵活性，能顺利地帮客户进行手工工艺的转移和放大生产工作，助力全球细胞治疗产业发展。

[参考文献]

Cell & Gene Therapy Insights 2022; 8(1), 97–112

DOI: 10.18609/cgti.2022.027

Magnetic selection for consistent cellular starting material in autologous cell therapy manufacture