你是不是忽视了—宿主细胞DNA残留片段大小的检测！

宿主细胞DNA残留量和残留片段

大小质控解决方案

许多生物制品如基因治疗产品、疫苗、重组抗体药等均需用到动物细胞、细菌或酵母作为宿主细胞进行生产。然而，宿主细胞DNA的残留，具有潜在的致瘤性和/或传染性风险，因此，需严格的控制生物制品中宿主细胞DNA的残留。

我国药典以及美国FDA均对宿主残留DNA量进行明文规范：例如2020版《中国药典》明确规定用Vero细胞生产人用狂犬病疫苗，Vero细胞DNA残留应不高于3ng/剂；FDA在《Characterization and Qualification of Cell Substrates and Other Biological Materials Used in the Production of Viral Vaccines for Infectious Disease Indications》的行业指南中要求对残留的DNA进行检测。

由于法规的严格规范，我国药典（2020年版）三部通则推荐了三种方法检测宿主细胞残留 DNA 含量，包括DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR法，目前行业内对宿主细胞DNA含量残留检测已达成共识。

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宿主细胞DNA残留片段大小检测的重要性

随着技术的发展，人们认识到，除了要减少残留DNA的量，也应该降低宿主DNA片段的大小至功能基因大小（基于目前的证据，大约200bp）以下，从而减少致瘤性和感染性风险。

基于此，CDE 2022年5月发布的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术 指导原则（试行）》中明确指出，生产若使用了肿瘤细胞系（如 Hela 细胞）、致瘤细胞系，或携带有致瘤基因、病毒来源序列的细胞（如 HEK 293T 细胞），在确保无完整活细胞残留的同时，需对DNA的残留量和残留片段大小进行控制，合理拟定标准限度。如有可能，建议尽量将残留DNA控制在10ng/剂以内， DNA残留片段的大小控制在200bp以下。

对于产品中已知的、具有潜在安全性风险的特定转化序列，如 HEK 293T 细胞携带的 Adv E1A 序 列、SV40 大 T 抗原序列，Hela 细胞携带的 HPV（Human Papilloma virus）E6/E7 基因等，应分别进行残留控制。对于 AAV 等易于将非载体DNA包装入病毒颗粒的病毒载体，在选择包装细胞、辅助病毒和包装质粒时应考虑相关外源 DNA 包装入病毒颗粒的潜在风险。

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用什么方法检测宿主DNA残留片段大小？

相比于多种方式用于DNA宿主残留量的检测，用哪种方法来检测宿主DNA残留片段大小，中国药典并没有明确规定。

但是对于核酸片段大小的检测，这并不是一个新概念，在日常的分子实验中，对核酸片段大小的界定可通过核酸电泳初步评估。

然而，更高效和便捷的核酸片段大小分析设备例如LabChip GX Touch核酸分析仪早已在NGS领域大展宏图，生物制药宿主DNA残留片段大小检测更是小试牛刀。

LabChip GX Touch核酸分析仪采用微流控毛细管电泳分离技术可以快速完成宿主细胞DNA残留片段大小检测，让您实现自动化、高通量、高灵敏度、可靠的宿主细胞DNA残留片段大小质控。

Revvity LabChip片段分析仪，单次通量最大384个样本，单样本最快30s，检测96个样本不到2小时，随意选孔，随测随检，无需凑样，不用担心样本太多反复操作带来的烦恼。