看了这个，才知道内毒素检测方法怎么选！

一、什么是内毒素

内毒素，英文名为Endotoxin，是革兰氏阴性菌菌体中存在的毒性物质总称，为多种革兰氏阴性菌细胞壁上的特有结构。细菌内毒素主要由磷脂、脂蛋白和脂多糖（LPS）组成，其中脂多糖（LPS）是天然或实验室制备的内毒素复合物的生物活性部分，发挥毒性作用的是类脂质A（Lipid A）。不同革兰氏阴性菌的脂质A结构基本相似，所以由此类细菌引起的感染导致的毒性效应大致相同，主要表现为发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。当细菌死亡裂解或者自溶后，内毒素会被大量释放出来。内毒素耐热性和化学稳定性很强，所以一般的方法很难去除或灭活内毒素。

二、 为什么要检测内毒素

环境中广泛存在的格兰氏阴性菌容易污染生产过程，其裂解后会释放出内毒素，因内毒素耐热性和化学稳定性强而难以灭活，所以一旦有内毒素污染进入血液，即使极少量也能引起发热休克等严重反应，因而内毒素与其他已知热原污染物相比，显示更强的热原性。所以内毒素被指定为应加以控制的物质，对用于人和动物的注射药品如化学药品、抗生素、放射性药品、生物制品以及医疗器械如透析液、植入式器械等的原辅料、中间和放行产品均需要进行内毒素检测，以确保制品的安全性。

三，内毒素检测方法：根据反应原理，内毒素检测方法可分为以下4种：凝胶法、浊度法、显色法和重组C因子法。

鲎试剂检查法：20世纪70年代，分为凝胶法、浊度法和显色基质法。优点：易操作，灵敏度高，可用于内毒素定量检测;缺点：鲎血批次间有差异；对革兰氏阴性菌以外的内毒素不灵敏；易受β-葡聚糖（β-Glucans）影响而产生假阳性；鲎受到动物保护，无法大批量供应。

重组C因子法（rFc）：21世纪初，通过重组方法产生C因子。优点：C因子来源稳定，受批次影响小；操作简单快速；更强的抗干扰能力（不受β-glucans影响）；专属性好。缺点：来源于不同品种鲎血蛋白序列的重组蛋白对内毒素的反应性可能不同。

四、内毒素实验过程中的常见问题和注意事项

Q1：用于内毒素实验的耗材和试剂如何选择？

A1：一般选择内毒素试剂盒厂家配套的试剂和耗材，如需额外购买，一定要选择除热原的产品用于内毒素检测实验（除热原指内毒素浓度小于 0.005 EU/mL）；另外也可采用超滤法、活性炭法、热处理法、化学降解法、亲和色谱法等。

Q2：如何选择鲎试剂的灵敏度值？

A2：通常因为待测样本中存在干扰因子，所以样本通常需要进行处理或者稀释。建议选择灵敏度高的鲎试剂进行实验。

问3：是否每一批注射用水检查细菌内毒素时都需要加入阳性对照？

答3：是的

问4：细菌内毒素工作品用检查用水稀释后，实验剩下的可以保存再利用吗？

答4：稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟，配置时间超过4小时的内毒素溶液应丢弃。

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