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解决方案
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背景
PD-L1蛋白在肿瘤细胞或肿瘤微环境(TME)中的高表达已被确定为预测免疫治疗疗效的生物标志物,并被FDA批准为各种实体瘤开始治疗的指标。然而,没有证据表明循环PD-L1表达是否与组织PD-L1表达一致,以及循环PD-L1水平是否能预测组织PD-L1表达。由于分离过程复杂,临床样本中EV外泌体生物标志物的鉴定和定量仍然具有挑战性。通过流式细胞术技术评估外泌体需要在检测前分离外泌体,这在临床环境中是不可行的。相比之下,Simoa®平台可能提供一种超灵敏、无创、全自动和高通量EV检测,具有双EV生物标志物靶向特征。我们首次开发了基于Simoa®技术的PD-L1 + EV检测测定法,并确定了T-EVs 与肿瘤组织之间PD-L1 表达的显着相关性。
方法
含有EV的样品与包被有捕获Epcam抗体的磁珠一起孵育。将磁珠-EV复合物与生物素化的PD-L1检测抗体和SBG依次孵育,然后加载到Simoa光盘上。SBG与 RGP的催化反应在微孔中受到限制。如果将磁珠-EV-检测抗体-SBG复合物加载到孔中,该仪器会检测到荧光信号增加。
图1. 用于检测EV的Simoa免疫测定法的原型
结果
TPS临界值比较了表达PD-L1的患者和不表达PD-L1的患者之间的Epcam-PD-L1 水平,当TPS截止值设置为10%时,观察到最高的AUC。在此临界值下,阳性样品中的Epcam-PD-L1 EV水平显著升高。此外,Epcam-PD-L1 EV水平与每位患者的TPS 乘以肿瘤体积的相关性较高。
图2. Epcam-PD-L1 EV信号在PD-L1高表达样本中(TPS>10%)浓度较高(左图);Epcam-PD-L1 EV信号与TPS*Vol之间呈现较强相关性(右图)
结论
根据我们的结果,Simoa®原型检测特定来源的细胞外囊泡,可能提供一种无创和动态的方法来监测接受免疫治疗的患者的肿瘤PD-L1表达。
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